由前述结果可知，N-APPJ能够高效地灭活口腔内的各种细菌生物膜。而在实际临床应用中，往往还需采用多种医疗手段辅助治疗。例如，在口腔临床上，除了采用生理盐水进行冲洗，还会使用一些其他药物来加强消毒效果，例如采用洗必泰（CHX）等抗生素药物进行抗菌。由于上述药物对生物膜的穿透作用有限，而N-APPJ已证实具有很好的穿透细菌生物膜灭菌的能力，因此，本节将介绍使用等离子体与CHX 相结合的方式来实现灭菌的效果。
首先采用标准方法制备粪肠球菌悬液，通过分光光度计调整粪肠球菌悬液浓度为3×106 CFU/mL；然后从5名患有根尖周炎的志愿者的受感染单根牙齿的根管中收集混合菌群，混合在BHI中；之后按照标准步骤将细菌细胞浓度调整到3.0×107CFU/mL。
将无菌牛牙本质块（5mm×5mm×0.17mm）放入24 孔板内，其中一半用粪肠球菌感染，而另一半用人的根管感染混合菌群感染。将200μL 细菌悬液和1.8mL无菌BHI肉汤滴入到每个孔中，在37 ℃厌氧条件下分别培养一周和三周，隔天换液。培养完毕除去孔板中多余的肉汤，将长满生物膜的牛牙本质片用无菌盐水冲洗1min，除去未附着的细菌以及杂质后备用。
实验装置结构在2.2.1节的基础上加设了一个装有2% CHX 的药剂瓶，其中，CHX 溶液由浓度为20%的原液配制，并连接在气管上，如图2.3.17所示。通过脉冲高压使掺有药剂的气体产生等离子体，所用脉冲电压的幅值为8 kV，频率为8kHz，脉宽为1600ns。工作气体为He+1% O2，气体流量为1L/min。等离子体喷嘴末端距样本的间距为5mm。
图2.3.17 CHX N-APPJ发生装置示意图[71]
实验分为5组，分别进行2min和5min的处理。第一组由单独N-APPJ处理，第二组由2%CHX 改良的N-APPJ处理，第三组由掺2% CHX 的工作气体处理（无等离子体），第四组由2 mL2% CHX 处理，最后一组由2 mL 0.9% 生理盐水处理，每组单个实验条件重复三个样本。处理完毕，用生理盐水轻轻冲洗样品。
每个样品随机选取5个区域（每个区域0.3mm×0.3mm）使用CLSM 检测，并进行三维重建分析。每组进行30次观测，两种处理时间各观测15次。对于培养一周的生物膜扫描深度设置为15μm（步长为1μm，扫描15次），对于培养三周的生物膜扫描深度设置为50μm。通过SPSS统计软件进行随机多重比较，结合单因素方差分析检验组间差异，当P＜0.05时认为结果具有统计学意义。
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图2.3.18 培养三周的生物膜的三维CLSM 图像[71]
（a）～（j）为粪肠球菌生物膜；（k）～（t）为多菌种混合生物膜；（a）和（k）为等离子体处理2min；（b）和（l）为等离子体处理5min；（c）和（m）为CHX N-APPJ处理2min；（d）和（n）为CHX N-APPJ处理5min；（e）和（o）为2%CHX+工作气体处理2min；（f）和（p）为2%CHX+工作气体处理5min；（g）和（q）为CHX 冲洗2min；（h）和（r）为CHX 冲洗5min；（i）和（s）为生理盐水处理2min；（j）和（t）为生理盐水处理5min
图2.3.18给出了牛牙本质块上生物膜的三维CLSM 图像，可以看出，培养一周和三周的细菌生物膜生长良好。其中处理组的死细胞（红色）比例从40%～80%不等，而对照组（第三组和第五组，分别为工作气体以及生理盐水处理）的死细胞比例仅为10%～13%。
图2.3.19为各个实验条件下细菌死亡的占比数据。随着时间的增加，生物膜中细菌死亡数目明显增加（P＜0.05）。单独N-APPJ处理和CHX 处理之间的抗菌效率没有明显差异（P＞0.05），这表明N-APPJ具有较好的灭活能力。而使用药物增强型等离子体射流处理，无论是2min 还是5min，其灭活效率相比其他处理方式都是最优的（54%～80%，P＜0.05），表明将抗菌药物与等离子体结合使用可以明显改善总体的抗菌效果。此外，进一步计算表明，处理仅培养一周的生物膜死细胞数量要比培养三周的高出7%～14%，说明在生物膜形成早期处理将具有更好的治疗效果。
图2.3.19 杀菌处理2min和5min后生物膜中死细胞体积占比[71]
*处理时间之间的差异明显（P＜0.05）；†‡处理有明显的效果（P＜0.05）；§新老生物膜之间差异明显（P＜0.05）
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