百子莲愈伤组织胚性启动调控技术：形态学观察

百子莲愈伤组织呈现半透明状，细胞排布较为紧密。PIC继代培养的胚性愈伤组织呈现为黄色颗粒状或部分细胞成胚，其中1.5 mg/L PIC继代培养的胚性愈伤组织细胞形态均一化程度最高，呈现明显的颗粒状；NPA继代培养的胚性愈伤组织具有明显成胚的现象。通过切片观察细胞形态，愈伤组织细胞较大，细胞直径200～300μm，细胞核较小，胞内富含多糖类物质；1.0 mg/L PIC继代培养的胚性愈伤组织具有两种细胞形态，一种为细胞核明显、细胞质致密具有很强分生能力的细胞，另一种为细胞核小、胞质染色较浅的细胞；1.5 mg/L PIC继代培养的胚性愈伤组织细胞致密、细胞直径在15～30μm之间，细胞核染色很深、细胞排列紧密并具备一定的极性结构；2.0 mg/L PIC继代培养的胚性愈伤组织呈现块状，细胞核小，细胞质不浓密，组织有开始分化的迹象。NPA继代培养的胚性愈伤组织表现出明显的成胚现象（见图3-1）。各样品组织的PAS染色表明百子莲愈伤组织中富含大量被染成红色的淀粉粒，而其他胚性愈伤组织中淀粉粒含量明显低于愈伤组织。扫描电镜显示愈伤组织细胞较大且单一；PIC继代培养的胚性愈伤组织细胞呈现颗粒状突起，大小在20μm左右，另外1.0与2.0 mg/L PIC处理的材料还有部分块状组织大小在1～3 mm之间；而NPA继代培养的胚性愈伤组织形成了2～4 mm大小的胚状体，0.5 mg/L NPA处理的材料较为正常，呈现棒状胚形态，而1.0与1.5 mg/L NPA处理的材料多形成畸形胚（见图3-1）。

图3-1　百子莲体胚诱导及细胞形态结构观察(www.xing528.com)

（a）百子莲愈伤组织（callus）　（b）～（g）不同浓度PIC与NPA继代培养的胚性愈伤组织
（EC）　（b）1.0 mg/L PIC　（c）1.5 mg/L PIC　（d）2.0 mg/L PIC　（e）0.5 mg/L NPA　（f）1.0 mg/L NPA（g）1.5 mg/L NPA
②解剖镜观察　③切片番红染色显微观察　④多糖染色组织化学观察　⑤⑥扫描电镜超微观察。