甘草植株再生体系建立及多倍体诱导研究

时间：2023-11-04 理论教育版权反馈

【摘要】：本研究以光果甘草无菌苗的胚根、下胚轴、子叶、真叶、芽及节间为外植体，在不同激素水平下，筛选出诱导愈伤组织的形成、芽分化与增殖及根系分化的最佳条件，从而建立光果甘草植株再生体系。该激素组合下，光果甘草6种外植体愈伤组织的质地好，颜色较绿。

甘草植株再生体系建立及多倍体诱导研究

1 光果甘草植株再生体系的建立

光果甘草（Glycyrrhiza glabra L．）又称欧甘草，在组织培养方面，仅报道光果甘草下胚轴和子叶的愈伤组织诱导率分别为：96．3％、66．0％（杨英等，2007），而对于光果甘草完整的组培体系的研究却未见报道。本研究以光果甘草无菌苗的胚根、下胚轴、子叶、真叶、芽及节间为外植体，在不同激素水平下，筛选出诱导愈伤组织的形成、芽分化与增殖及根系分化的最佳条件，从而建立光果甘草植株再生体系。

1．1 材料与方法

1．1．1 无菌苗的获得

选取饱满的光果甘草种子，用98％浓硫酸流处理40min，蒸馏水冲洗种子3～5次。在无菌条件下，将处理好的种子用无菌水冲洗3次，75％乙醇浸泡20～30s，无菌水冲洗3次，用0．1％升汞消毒8min，无菌水冲洗4次，用无菌滤纸吸去种子表面水分，接种于MS培养基。暗培养，待种子萌发后，转入光下培养，获得无菌苗。

1．1．2 诱导愈伤组织

取无菌苗的胚根、下胚轴、子叶、真叶、芽及节间（长为0．5cm），分别接入含有不同激素水平的MS培养基中，诱导愈伤组织。暗培养5d后转到光下培养。每7d观察一次， 28d为一个周期。

1．1．3 诱导分化

取生长良好、色泽均匀的6种不同来源愈伤组织，分别接入含有不同激素水平的MS培养基上，诱导愈伤组织分化。暗培养5d后转入光下培养。每7d观察一次。

1．1．4 芽的增殖

选取光果甘草芽（0．5cm）在无菌条件下接入含有不同KT水平的MS培养基中，培养28d后，计算外植体的成活率及芽的增殖倍数。

1．1．5 植株生根

将生长健康的分化苗，接入含有不同IBA水平的MS培养基中，培养生根。28d后，计算生根数。

1．1．6 移栽

选取生长旺盛的生根苗，经炼苗后，移栽入经过灭菌的基质中。28d后计算成活率。

1．1．7 培养条件

光照培养温度（25±2）℃，光照强度为40μmol／（m2·s），光照时间12h／d。

1．1．8 数据处理与分析

各激素组合设3次重复，每次重复接种6瓶，每瓶接种材料为5个。用Excel统计、处理数据，用SPSS 17．0软件进行方差分析。

1．2 结果与分析

1．2．1 不同激素组合对6种外植体诱导愈伤组织的影响

（1）6－BA和NAA组合对外植体诱导愈伤组织的影响。

表1 6－BA和NAA组合诱导6种外植体出愈的多重比较

注：相同外植体在不同激素环境中出愈率之间进行比较，相同字母代表数据之间不存在极显著差异（P＝0．01）。

表2 6－BA和NAA组合对6种外植体诱导愈伤组织的影响

续表

方差分析显示，6种外植体在5种激素水平下都表现出极显著差异（表1）。该激素组合下，光果甘草6种外植体愈伤组织的质地好，颜色较绿。表2显示，根在MS＋6－BA 3．0mg／L＋NAA 1．0mg／L上培养时，出愈率最高达100％。下胚轴在MS＋6－BA 0．5mg／L＋NAA 1．0mg／L时，出愈率达97．5％。但在MS＋6－BA 1．0mg／L＋NAA 1．0mg／L时，下胚轴愈伤质地好并有绿色芽点。子叶和真叶在MS＋6－BA 3．0mg／L＋NAA 1．0mg／L时，出愈率最高，分别为100％和93．94％。芽的出愈率在5组激素水平下均较高，在MS＋6－BA 0．5mg／L＋NAA 1．0mg／L和MS＋6－BA 3．0mg／L＋NAA 1．0mg／L时，高达100％。节间在MS＋6－BA 3．0mg／L＋NAA 1．0mg／L时，出愈率为100％，愈伤组织质地疏松。在6－BA和NAA激素组合下，下胚轴、真叶和子叶的愈伤组织颜色呈绿色，质地较其他外植体的愈伤组织好。5组激素水平下，子叶的愈伤组织质地均致密。

（2）6－BA和2，4－D组合对外植体诱导愈伤组织的影响。

表3 6－BA和2，4－D组合诱导6种外植体出愈的多重比较

续表

注：相同外植体在不同激素环境中的出愈率之间进行比较，相同字母代表数据之间不存在极显著差异（P＝0．01）。

表4 6－BA和2，4－D组合对不同外植体诱导愈伤组织的影响

方差分析显示，6种外植体在4种激素水平下出愈率之间呈极显著差异（表3）。在6－BA和2，4－D的激素组合中，6种外植体获得的愈伤组织质地疏松，呈白色或黄色，且易褐化。在外植体诱导2周左右时，部分材料开始褐化。表4显示，以光果甘草根为外植体，随着6－BA浓度升高，根的出愈率随之降低，MS＋6－BA 0．5mg／L＋2，4－D 1．0mg／L是根的最佳诱导培养基，出愈率最高，为84．62％。下胚轴在MS＋6－BA 1．0mg／L＋2，4－D 1．0mg／L时，出愈率最高，为94．59％。子叶在6－BA和2，4－D激素组合下，愈伤组织致密，呈黄绿色，在MS＋6－BA 0．5mg／L＋2，4－D 1．0mg／L时，出愈率达100％。真叶在MS＋6－BA 0．5mg／L＋2，4－D 1．0mg／L时，出愈率最高，为94．12％，但在MS＋6－BA 1．0mg／L＋2，4－D 1．0mg／L时，真叶的愈伤组织质地最好，愈伤组织呈绿色。芽在MS＋6－BA 1．0mg／L＋2，4－D 1．0mg／L时，出愈率高达100％。节间在MS＋6－BA 1．0mg／L＋2，4－D 1．0mg／L时，出愈率达69．57％，愈伤组织质地疏松。

（3）KT和2，4－D组合对外植体诱导愈伤组织的影响。

表5 KT和2，4－D组合诱导6种外植体出愈的多重比较

注：相同外植体在不同激素环境中的出愈率之间进行比较，相同字母代表数据之间不存在极显著差异（P＝0．01）。

表6 KT和2，4－D组合对不同外植体诱导愈伤组织的影响

方差分析显示，6种外植体在4种激素水平下出愈率之间呈极显著差异（表5）。在KT和2，4－D的激素组合中，6种外植体愈伤组织质地疏松，呈白色或黄色。表6显示，光果甘草根、下胚轴、真叶和节间，随着KT浓度升高，出愈率降低。在MS＋KT 0．5mg／L＋2，4－D 1．0mg／L时，根、下胚轴、真叶和节间的出愈率最高，分别为91．18％、97．37％、80．65％和72．73％。在KT和2，4－D激素组合下，子叶主要在切口处产生愈伤组织，呈颗粒状，愈伤组织致密，当MS＋6－BA 1．0mg／L＋2，4－D 1．0mg／L时，出愈率高达100％。在MS＋6－BA 1．0mg／L＋2，4－D 1．0mg／L时，真叶的愈伤组织呈黄绿色，愈伤组织质地疏松。芽在MS＋6－BA 2．0mg／L＋2，4－D 1．0mg／L时，达96．3％。

1．2．2 愈伤组织的分化

（1）不同激素水平对芽愈伤组织分化影响。

表7 6－BA和NAA对芽愈伤组织分化的影响

注：芽来源愈伤组织在不同激素环境中的分化率之间进行比较，相同字母代表数据之间不存在极显著差异（P＝0．01）。

表7显示，愈伤组织在MS＋6－BA 1．0mg／L＋NAA 0．1mg／L时，芽的诱导分化率为97．87％。愈伤组织在该激素水平下，10天左右产生绿色芽点。诱导愈伤组织分化产生芽时，6－BA的浓度要适中，低浓度时，愈伤组织易分化产生不定根；浓度过高，在25天左右时，芽基部的愈伤组织易褐化。

（2）不同激素水平对其他5种外植体来源的愈伤组织分化的影响。

表8 6－BA和NAA对下胚轴愈伤组织分化的影响

注：下胚轴来源愈伤组织在不同激素环境中的分化率之间进行比较，相同字母代表数据之间不存在极显著差异（P＝0．01）。

在5种来源愈伤组织中，根和节间的愈伤组织疏松，在5种分化培养基中，未分化出甘草植株。子叶的愈伤组织虽然致密，但在分化培养基上培养，易褐化。真叶的愈伤组织易不定向分化，易分化出根。由表8可知，下胚轴来源的愈伤组织分化率很低，仅在6－BA（0．5mg／L～2．0mg／L）阶段时，下胚轴来源愈伤组织分化出不定芽。在6－BA 1．0mg／L时，分化率最高，为9．80％。

1．2．3 KT对光果甘草芽增殖的影响

表9 不同KT浓度对光果甘草芽增殖的影响

注：光果甘草芽在不同KT浓度下的成活率之间进行比较，相同字母代表数据之间不存在极显著差异（P＝0．01）。

KT是细胞分裂素，促进细胞分裂、生长，诱导愈伤组织生芽。由表9可知，芽在KT 1．0mg／L时，成活率最高，为89．1％。在KT 0．5mg／L时，芽的增殖倍数最高，为3．5倍。

1．2．4 生根

表10 IBA对组培苗生根的影响

注：分化苗在不同IBA浓度下的生根率之间进行比较，相同字母代表数据之间不存在极显著差异（P＝0．01）。

生根培养基中主要加入不同浓度生长素IBA。表10显示，当IBA 1．0mg／L时，生根率最高，为80％。植株在该激素水平下不但生长旺盛，根也较粗壮，平均根数也较多。

1．2．5 移栽

挑选已生根，生长茁壮的组培苗，放在自然光下，炼苗2d；封口膜揭去一半，继续炼苗1d；揭去封口膜，炼苗2d；取出植株，仔细清洗根部残存的培养基，移栽入经过灭菌处理的基质（沙土∶蛭石＝1∶1）中。保持空气湿度为85％，移栽培养28d后，生根苗的成活率达到95％。

1．3 讨论

光果甘草的6种外植体（根、下胚轴、子叶、真叶、芽和节间）都可以诱导出愈伤组织。诱导愈伤组织的激素主要为生长素（NAA、2，4－D）、细胞分裂素（KT、6－BA）。实验证明，6－BA与NAA组合是光果甘草诱导愈伤组织的最佳激素组合，6种外植体在此激素组合下的出愈率均较高，且愈伤组织呈绿色或黄绿色。在KT与2，4－D组合中，诱导外植体产生的愈伤组织量少，且愈伤组织质地疏松，呈白色或黄色。在6－BA与2，4－D组合中，愈伤组织为黄色或白色，质地疏松，仅真叶在6－BA 1．0mg／L时，愈伤组织质量较好呈黄绿色。在3种激素组合中，根在细胞分裂素浓度低时，出愈率最高。其他的外植体的出愈率与细胞分裂素浓度之间的关系不明显，说明根较其他5类外植体对细胞分裂素的要求低。

在愈伤组织诱导分化时，实验证明芽来源的愈伤组织较其他5种外植体来源的愈伤组织易分化。芽愈伤组织在MS＋6－BA 1．0mg／L＋NAA 0．1mg／L上培养时，10天左右产生绿色芽点，分化率为97．87％。诱导愈伤组织分化时，细胞分裂素浓度低时，愈伤组织易产生不定根；细胞分裂素浓度高时，愈伤组织基部易褐化。同时，培养时间长短对愈伤组织分化也有一定的影响。培养愈伤组织的天数过长，分化过程中也易褐化。

芽的增殖对甘草的组织培养或扩大组培苗生产有很大的意义。在预实验中，将6种外植体（根、下胚轴、子叶、真叶、芽和节间）接入含有不同KT水平的培养基中。观察发现，6种外植体在7d后，切口均有明显黄色褐化的痕迹；14d时部分子叶明显膨大，无愈伤化；个别真叶的主叶脉处有零星愈伤组织；芽的节数明显增加；根、下胚轴和节间褐化严重。发现KT有很强的促进光果甘草芽增殖的作用。实验发现，芽在KT 0．5mg／L时，芽的增殖倍数最高，为3．5倍。

在MS＋IBA 1．0mg／L时，生根苗生长茁壮，根系较长，平均根数多。在移栽生根苗时，炼苗很关键，可以提高组培苗对外界环境的适应能力，也提高苗移栽成活率。组培体系的建立，为光果甘草的进一步研究提供了新的资料。

2 光果甘草多倍体的诱导

多倍体育种是获得植物新品种的主要途径之一。多倍体药用植株的人工获得主要通过化学试剂的诱导，使其染色体组加倍。多倍体植株主要表现为器官的巨大型，抗逆性强，药材生物产量高等。本文主要运用3种方法（秋水仙素浸种法、秋水仙素琼脂涂抹法、秋水仙素浸泡茎段法）来处理光果甘草，以寻求诱导光果甘草多倍体的最佳方法。

2．1 材料与方法

2．1．1 无菌苗的获得

选取饱满的光果甘草种子，用98％浓硫酸处理40min，蒸馏水冲洗种子3～5次。将种子晾干备用。在无菌条件下，将浓硫酸处理好的光果甘草种子用无菌水冲洗3次，75％乙醇浸泡20～30s，无菌水冲洗3次，0．1％升汞浸泡8min，无菌水冲洗4次，用无菌滤纸吸去种子表面水分，接种于MS培养基。先暗培养，待种子萌发后，转入光下培养，获得无菌苗。

2．1．2 多倍体诱导方法

秋水仙素浸种法：将浓硫酸处理好的种子用蒸馏水浸泡2～3h，使种子微微膨胀，处于萌动状态。随机将种子分为5组，分别于0mg／L、50mg／L、100mg／L、200mg／L、400mg／L秋水仙素溶液中浸泡48h。无菌条件下，用无菌水冲洗处理过的种子3次， 75％乙醇浸泡20～30s，无菌水冲洗3次，0．1％升汞浸泡8min，无菌水冲洗4次，用无菌滤纸吸去种子表面水分，接种于MS基本培养基。先暗培养，待种子萌发后，转入光下培养。28d后，记录出芽株数。

秋水仙素琼脂涂抹法：选取培养10d的无菌苗，随机分为4组。一组为对照；其中3组分别用灭菌处理过的移液管移取等量溶化态含有200mg／L秋水仙素的0．2％琼脂涂抹光果甘草的芽尖，分别于1d、2d、3d后将芽尖的琼脂处理干净。记录原株高，并每7d测量株高。

秋水仙素浸泡茎段法：在无菌条件下，取无菌苗的茎段于0mg／L、50mg／L、100mg／L、200mg／L、400mg／L秋水仙素溶液中分别浸泡12h、24h、36h、48h，取出后用无菌滤纸吸取茎段表面的残液，接种于MS＋6－BA 1．0mg／L＋NAA 0．1mg／L上培养。28d后，计算茎段的成活率。

2．1．3 实验材料发生变异的判断标准

实验材料与对照组比较有明显变化特征，与对照组的株高有明显差异，整株表现粗壮，子叶肥厚以及颜色浓绿等特征，以此判断实验材料是否发生变异。

2．1．4 愈伤组织的诱导及取材

将成活的茎段转入MS＋6－BA 1．0mg／L＋NAA 1．0mg／L上诱导愈伤组织。暗培养5d后转到光下培养。每7d观察记录一次，培养28d。培养条件：温度（25±2）℃，光照强度为40μmol／m2·s，光照时间12h／d。待愈伤组织培养10天左右，用镊子夹取少量生命力旺盛的组织以待用。在早上8：00—10：00取材。

2．1．5 染色体数目核查

待用的愈伤组织材料用蒸馏水冲洗数次，0．002mol／L的8－羟基喹啉处理4h，卡诺固定液（无水酒精：冰醋酸＝3∶1）中固定4h，1mol／L盐酸60℃下解离5min，蒸馏水冲洗数次，卡宝品红染色6min，常规压片，轻敲至雾状。随机选取100个以上处于分裂期的细胞，计数染色体数目。

2．1．6 数据处理与分析

各处理设3次重复，每次重复处理种子或种子苗25株、节间35个。用Excel统计、处理数据，用SPSS 17．0软件进行方差分析。

2．2 结果与分析

2．2．1 秋水仙素浸种法诱导效果

表11 秋水仙素对光果甘草种子的诱导效果

注：光果甘草种子在不同秋水仙素浓度处理下的萌发率之间进行比较，相同字母代表数据之间不存在极显著差异（P＝0．01）。

接种5天左右，种子开始萌发。无秋水仙素处理的种子萌发率为100％。从表11可知，当秋水仙素浓度为100mg／L时，种子的萌发率最高。大部分种子苗与对照苗没有明显差异，10％植株明显较对照组的种子苗矮壮、子叶肥厚、深绿色。在25天左右时，种子苗根部开始呈水渍状腐烂，仅个别植株矮化较明显，大部分种子苗初期矮化明显，后期与对照组无较大差别。

表12 秋水仙素琼脂涂抹法对光果甘草苗的诱导效果

注：光果甘草种子苗在相同浓度秋水仙素处理不同时间下的增高率、变异率之间进行比较，相同字母代表数据之间不存在极显著差异（P＝0．01）。

由表12可知，植株随200mg／L秋水仙素处理时间的增加，种子苗的增高率降低，矮化度提高。植株的变异率随着秋水仙素处理天数的增加而增加。200mg／L秋水仙素处理3d时，种子苗的变异率最高，为35．71％。培养2周后，有少数顶芽枯萎，随着培养天数的增加，顶芽枯萎的株数增多，并逐渐死亡。在培养28d后，有40％的顶芽死亡，10％的顶芽枯萎。发生变异植株的涂抹部位明显膨大，子叶明显呈深绿色，明显矮于其他植株。

2．2．2 秋水仙素浸泡茎段法的诱导效果

表13 秋水仙素浸泡茎段的诱导效果

注：光果甘草茎段在不同浓度秋水仙素及不同处理时间下的存活率、变异细胞平均比率之间进行比较，相同字母代表数据之间不存在极显著差异（P＝0．01）。

由表13可知，在100mg／L秋水仙素处理12h，茎段的成活率最高，为84．13％。对照组成活率为91．14％。同一秋水仙素浓度下，茎段浸泡12h的成活率较其他处理高。在50mg／L和100mg／L秋水仙素下，随着处理时间增加成活率下降，但在48h时，略有回升。200mg／L和400mg／L秋水仙素下，整体呈下降趋势，处理36h时，略有回升。对照组较处理组的节间伸长程度大，纤细。当400mg／L秋水仙素处理24h，愈伤组织中变异细胞平均比例最高，为38．89％。其中，部分外植体成活率太低，获得的愈伤组织量少，呈水渍状或褐化，导致无法进行核型分析，在表13中标记为“／”。

2．3 讨论

由种子的萌发率、顶芽的枯萎和死亡、茎段的成活率说明秋水仙素对植株材料有一定的毒害作用（鲍智娟等，2009）。3种方法中，秋水仙素浸泡茎段法是最可行的方法，便于观察，且变异率也较秋水仙素浸种法和秋水仙素琼脂涂抹法高。后两种方法处理植株初期具有明显多倍体特征，但后期多倍体特征不稳定。有可能是因为四倍体细胞所占比例低，分裂速度慢，二倍体细胞比例有明显的上升，发生回复突变（张蜀敏等，2008）。

秋水仙素诱导植株易产生嵌合体（武振华等，2005），本实验中400mg／L秋水仙素处理24h，愈伤组织中变异细胞为38．89％，其中单倍体占4％，三倍体占21．11％，四倍体占13．78％。秋水仙素的处理，可能打破了光果甘草染色体组正常的复制和分裂，导致得到单倍体和三倍体细胞。在其他药用植株通过秋水仙素诱导获得的多倍体材料中，未发现有关单倍体和三倍体细胞的报道。

药用植物由于染色体的加倍，使得染色体上基因调控有效化学成分含量较正常二倍体高，从而使次生代谢产物含量明显增加，进一步提高了药用植物的质量（李富雄等， 2009）。若能保证加倍的光果甘草中有效化学成分的含量，运用到实际生产中，将解决我国目前对甘草资源亟需的现状。

3 愈伤组织中总黄酮含量的测定(www.xing528.com)

组织培养具有生产周期短、繁殖速度快以及可应用于工厂化生产等特点，日益受到人们关注。研究了不同激素组合与不同激素水平对光果甘草无菌苗的胚根、下胚轴、子叶、真叶、芽及节间为外植体诱导的愈伤组织中总黄酮的含量，以期筛选出黄酮高产的最佳外植体和最适培养基激素条件，为光果甘草的进一步研究和高效利用提供可靠的参数指标。

3．1 实验方法

3．1．1 无菌苗的获得（同2．1．1）

3．1．2 不同外植体愈伤组织的获得

将无菌苗的根、下胚轴、子叶、真叶、芽和节间切成0．5cm左右，在无菌条件下分别接入含有不同浓度激素组合的MS培养基中，诱导愈伤组织。暗培养5d后转到光下培养。每7d观察记录一次。培养28d，收获愈伤组织并置于60℃烘箱中烘干至恒重。研磨待用。

3．1．3 多倍体材料的获得

在无菌条件下，取无菌苗的茎段于不同浓度秋水仙素溶液中分别浸泡不同时间，取出后接种于MS＋6－BA 1．0mg／L＋NAA 0．1mg／L上培养。28d后进行核型分析，获得的多倍体材料为嵌合体（单倍体4％，二倍体61．11％，三倍体21．11％，四倍体13．78％）。

3．1．4 多倍体愈伤组织的获得

将经过秋水仙素处理的成活的茎段转入MS＋6－BA 1．0mg／L＋NAA 1．0mg／L培养基上诱导愈伤组织。暗培养5d后转到光下培养。每7d观察记录一次。培养28d后，愈伤组织置于60℃烘箱中烘干至恒重。

培养条件：温度（25±2）℃，光照强度为40μmol／（m2·s），光照时间12h／d。

3．1．5 标准曲线的建立

总黄酮含量的测定以芦丁为参比标准，用分光光度法测定。黄酮类化合物提取后，在碱性条件下，与铝盐（Al Cl3或Al（NO3）3）络合，可呈现红色的络合物反应，在500nm处测定其吸光度。标准曲线建立的方法依据《中华人民共和国药典》（2005版）中槐花总黄酮的测定方法。

精密称取于120℃下干燥恒重的芦丁对照品50mg，置于25m L容量瓶中，加甲醇适量，置水浴上微热，使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀。精密量取10m L置于100m L容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得芦丁标准溶液（每1m L含无水芦丁0．2mg）。精密量取上述溶液1m L、2m L、3m L、4m L、5m L、6m L，分别置25m L容量瓶中，各加水至6．0m L，加5％亚硝酸钠溶液1m L，混匀，放置6min，加10％硝酸铝溶液1m L，混匀，放置6min，加1mol／L氢氧化钠试液10m L，再加水至刻度，摇匀，放置15min，以相应试剂为空白。在500nm处测吸光度。

3．1．6 愈伤组织中总黄酮的提取

精密称取已研磨的光果甘草愈伤组织0．20g，以75％乙醇作为提取溶剂，料液比为1∶50，浸泡样品30min后超声提取40min，过滤。滤渣以1∶30料液比超声提取30min，过滤。合并两次滤液，置于25m L容量瓶中，75％乙醇定容。采用王磊等（2007）提取甘草中总黄酮的方法，并加以改进。

3．1．7 愈伤组织中总黄酮的测定

精密吸取提取液5m L，加入1m L水，其次如标准曲线的做法，在500nm处检测，平行测定3次。公式如下：

式中：P为总黄酮含量（mg／g）；A为吸光度值；5为稀释倍数；V为提取液体积（m L）；m为愈伤组织干重（g）。

3．1．8 数据处理与分析

所有待测定数据设3次重复，用Excel统计、处理数据，用Origin 7．0绘制标准曲线，用SPSS 17．0软件进行方差分析。

3．2 结果与分析

3．2．1 标准曲线的建立

以吸光度（A）为纵坐标，芦丁浓度为横坐标，用Origin 7．0绘制标准曲线，得回归方程：Y＝0．010 705 X－0．001 93，R＝0．999 9。可见，在8～48μg／m L范围内芦丁浓度与吸光度之间呈良好的线性关系。

图1 芦丁标准曲线

3．2．2 不同外植体愈伤组织中总黄酮含量测定的结果与分析

（1）6－BA与NAA组合对愈伤组织中总黄酮的影响。

表14 6－BA与NAA组合对愈伤组织总黄酮含量的影响