徒手切片法-植物学实验指导

徒手切片是用手持刀片，将新鲜材料或预先固定好的材料切成薄片的制作方法。徒手切片法的优点是不需要复杂的设备，方法简便，制片迅速，而且能观察到植物组织的自然色泽和活体结构，常用于研究植物解剖结构、植物资源鉴定等。缺点是对于体积过小、太软、太硬的材料则难以切片，而且不能制成连续切片。做好的薄切片经染色、脱水、透明、封固后可制作为永久装片。

1.取材

对于圆柱体材料取长1-15cm，扁平材料取长1cm、宽0.8-1cm。

2.切片

进行切片前，先准备好盛有清水的培养皿、毛笔、刀片等用具。

（1）一般材料的切片方法和步骤

在切片时用左手大拇指、食指和中指捏住材料，拇指略低于中指，使材料突出于手指之上，这样以免切伤手指。右手平稳地拿住刀片，将刀片平放在左手的食指之上，刀刃向内，且与材料断面平行，然后以均匀的力量，从左前方向右后方拉，材料要一次切下（切忌切片中途停顿或前后“拉锯”式切割，切片时要用臂力而不要用腕力，而且不要用力过大，也不能用刀片直接挤压材料，或从左右两个方向来回切割材料，这样都不能切出合格切片）。

为了避免材料干枯，应使材料的切面及刀刃上保持有水，呈湿润状态。待连续切若干片后，用毛笔蘸水刷下薄片，放入盛有固定液的培养皿中，再从中挑选出最薄的、最透明的、完整而又均匀的薄片，放在滴有水的载玻片上。用低倍镜检查，去掉不完全、不均匀、细胞不清楚的薄片，将理想的薄片装入固定液中备用。

（2）柔软或坚硬材料的切片法

过于柔软的器官，例如幼嫩的叶子，难以直接拿在手中进行切片。切片时需放在夹持物中，以便于操作。夹持物一般用胡萝卜根、土豆块茎、通草等，将要切的材料夹于其中，然后进行切片。

对于较坚硬的材料，需要经过软化处理才能进行切片。其软化方法通常是将要切的材料先切成小块，然后在开水中煮沸3-4h，再浸入软化剂［50%（体积分数）酒精∶甘油=1∶1］中，一昼夜后或更长时间后再切。

对于已经干燥或富含矿物质而更硬的材料，可先于15%的氢氟酸水溶液中浸渍数周后（使之充分浸透），再置于甘油中软化后方可进行切片。

3.番红染色

其目的在于增进细胞各部分结构折光率对比，使之易于识别，其原理为物理吸附作用和化学作用。将玻璃皿中的固定液倾去，用水浸洗2-3次，再倒去水。加入番红水溶液，放置4-8h，使材料染成深红色。(www.xing528.com)

4.脱水

其目的在于除去材料含有的水分，使之易透明，不易腐坏。洗去浮色后，逐次以20%、40%、60%、75%、85%各级浓度酒精脱去水分，每次约2-3min，最后倾去酒精溶液，将材料在低倍镜下检查，观察番红染色程度是否合适，若染色不深，须依次逆回到各级浓度酒精，再放入番红水溶液中重新染色。

5.固绿对染

倒去玻璃皿中的85%酒精，加入适量的固绿酒精溶液，染色10s左右。

6.再脱水

倒去固绿染料，加入95%的酒精，倒去95%的酒精，加入纯酒精2-3次，每次静置1-2min。

7.透明

倒去纯酒精一半，加入等量的二甲苯（若此时出现乳白色，证明脱水未尽，须立即返回纯酒精中去）；倒去纯酒精-二甲苯混合液，加入两次纯二甲苯，每次静置1-2min。

8.封固

待二甲苯挥发尽时，将薄片移至载玻片中部，立即滴一滴加拿大树胶（若做临时封片，则用纯甘油代之，注意封片剂的量要合适，不宜过多也不能太少）在薄片上，盖上盖片，放于平面处，待其干燥后即可永久保存使用。

9.贴标签

在制作好的玻片标本的右边贴上标签。标签写明某某材料横切片或纵切片，作者姓名及年、月、日。