1.感受态细胞的制备
（1）用枪头或接种环挑取单克隆菌落，接种入5mL LB液体培养基的培养管中，37℃ 180r/min培养过夜（14～16h）。
（2）取2～5mL过夜培养液，接入500mL LB液体培养基中，控制起始OD600至0.03～0.05。37℃180r/min振荡培养2～4h，每30min测一次OD，当OD值达到0.4时，停止培养。
（3）将菌液在冰上预冷30min。同时预冷离心机至4℃。
（4）随后将菌液分装到250mL预冷的离心瓶中，4℃4000r/min离心15min。
（5）弃上清，先用少量（如20～50mL）灭菌的冰水重悬沉淀的细胞团，然后加水稀释至离心瓶的2/3体积，充分悬起细胞。4℃4000r/min离心15min。
（6）弃上清，加少量灭菌水，重悬菌体，再加水至所有细胞悬浮于约250mL冰水中。4℃4000r/min离心15min。
（7）弃上清，往离心管中加入少量10%灭菌的预冷甘油，重悬菌体，再加10%甘油至终体积约为20mL。4℃4000r/min离心10min。
（8）小心弃去上清，加入2mL 10%灭菌的预冷甘油重悬细胞。
（9）将悬浮菌液以200μL/管分装于1.5mL的离心管中，在液氮中快速冷冻后，于-70℃冰箱中保存。
2.电转化
（1）从-80℃冰箱中取出感受态细胞，置于冰上解冻。
（2）将无菌的电击杯置于冰上预冷。
（3）将解冻的感受态细胞按照40～100μL/管转移至预冷的1.5mL离心管中，小心混匀，冰上放置。
（4）取 1～2μL纯化的质粒或克隆连接产物于 1.5mL的离心管中，冰上放置10min。
（5）打开电转仪（Bio-Rad基因脉冲系统），调至手动，调节参数设置为25μF，200Ω，电压为2.0kV（这些参数设置可以根据经验略作调整）。(www.xing528.com)
（6）将此混合物转移至已预冷的电击杯中，轻轻敲击电击杯使混合物均匀进入电击杯的底部。用吸水纸吸干电击杯外壁的冰水。
（7）将电击杯推入电转化仪，按一下“脉冲”键，听到蜂鸣声后，向电击杯中迅速加入1mL的SOC液体培养基，重悬细胞后，转移到1.5mL的离心管中。
（8）37℃220～250r/min复苏1h。
（9）离心，涂板，置于37℃，过夜培养，次日查看转化结果。
3.电击杯的清洗和保存
（1）用清水将用过的电击杯稍微冲一下，向电击杯中加入75%酒精冲洗。
（2）弃去酒精，再用蒸馏水冲洗2～3遍，然后用1mL的枪吸取超纯水反复吹打电击杯10次以上。
（3）加入无水乙醇1～2mL于电击杯中，浸泡5min。
（4）弃去无水乙醇，将电击杯倒置于吸水纸上让乙醇充分挥发。
（5）将清洗并干燥好的电击杯加上盖子，存放备用。
思考题
1.制备感受态细胞的原理是什么？
2.大肠杆菌超级感受态细胞与普通感受态细胞有什么区别？
3.如果实验中对照组本不该长出菌落的平板上长出了一些菌落，你将如何解释这种现象？
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