【摘要】：降落PCR是一种增加PCR反应特异性的优化方法。但这些方法既繁琐又耗时，降落PCR利用一种简单的手段克服了这些复杂的问题。编设降落PCR程序的目的是要设计一系列退火温度越来越低的循环，退火温度的范围应该跨越15℃左右，从高于估计Tm值至少几℃到低于它10℃左右。如果在降落PCR中，持续出现假象带，表明起始退火温度太低，或者目的扩增产物和非目的产物的Tm值相差无几，和（或）非目的扩增物以更高的效率扩增。
降落PCR（Touchdown PCR）是一种增加PCR反应特异性的优化方法。一般情况下，解决PCR非特异性扩增的方法是通过调整Mg2+或改变退火温度等来实现的。但这些方法既繁琐又耗时，降落PCR利用一种简单的手段克服了这些复杂的问题。其基本原理是：设计多循环反应程序以使相连循环的退火温度越来越低。开始时的退火温度选择为高于估计的Tm值，随着循环的进行，退火温度逐渐降到Tm值，并最终低于这个水平。这个策略有利于确保第一个引物-模板杂交事件发生在最互补的反应物之间，即那些生产目的扩增产物的反应物之间。尽管退火温度最终会降到非特异性杂交的Tm值，但此时目的扩增物已开始几何扩增，在剩下的循环中处于超过任何滞后（非特异）PCR产物的地位。由于目标是在较早的循环中避免低Tm值配对，在降落PCR中，必须应用热启动技术（hot start）。
编设降落PCR程序的目的是要设计一系列退火温度越来越低的循环，退火温度的范围应该跨越15℃左右，从高于估计Tm值至少几℃到低于它10℃左右。例如，如果一对引物的计算Tm值为63℃，可设定PCR仪的退火温度从66℃降到50℃（每两个循环降低退火温度1℃），再在50℃退火温度下做15个循环。如果在降落PCR中，持续出现假象带，表明起始退火温度太低，或者目的扩增产物和非目的产物的Tm值相差无几，和（或）非目的扩增物以更高的效率扩增。把退火温度每降低1℃时所需要的循环数增加到3或4，有可能在非目的产物开始扩增以前给目的产物增加竞争优势。这时，应从程序的末尾去掉相应的循环数，以避免过度循环扩增产物的降解和产生高分子质量的成片产物。(www.xing528.com)
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