1.Trizol法提取细菌总RNA
（1）挑取细菌单菌落，培养至稳定期，取菌液3mL离心得菌体于1.5mL离心管。
（2）每管加入1mL Trizol溶液，盖紧管盖，激烈振荡15s，室温静置5min。
（3）4℃，12000×g离心10min。
（4）取上清（约1mL）转入新的1.5mL离心管中。
（5）每管加入0.2mL氯仿（0.2倍体积Trizol溶液），盖紧盖，剧烈振荡15s。
（6）室温静置3min。
（7）4℃，12000×g离心10min。
（8）小心吸取上层水相，转入另一新的1.5mL离心管，测量其体积。
（9）加入1倍体积的氯仿，盖紧盖，剧烈振荡15s。
（10）室温静置3min。
（11）4℃，12000×g离心10min。
（12）小心吸取上层水相，转入另一新的已编号1.5mL离心管。
（13）加入0.5mL的异丙醇（0.5倍体积Trizol溶液），轻轻颠倒混匀。
（14）室温静置10min。
（15）4℃，12000×g离心10min，RNA沉于管底。
（16）小心吸去上清，加1mL 75%乙醇（预冷），并轻柔颠倒，洗涤沉淀。
（17）4℃，7500×g离心5min。
（18）小心弃上清，微离，吸去剩余乙醇，室温干燥10min。(www.xing528.com)
（19）各管用50μL DEPC处理过的双蒸去离子水溶解，55～60℃温育5min，分装，-80℃贮存（可贮存5周）。
2.RNA浓度的测定
取10μL RNA样品以双蒸水稀释至2mL，转入预先以无水乙醇隔夜浸泡后晾干的石英比色皿中，小心排除气泡，以等体积的双蒸水作为空白对照，在紫外分光光度计中分别测定260nm、280nm、360nm（参比波长）的光吸收值，根据公式计算RNA的浓度。
RNA浓度（μg /μL）=OD260×稀释倍数（200）×40（μg/mL）/1000
纯RNA样品的OD260/OD280比值为 1.8～2.0，若低于该值，表明存在蛋白质污染，可重新用苯酚∶氯仿抽提。该值为2.0时，RNA纯度为最高。
3.RNA质量检测
将RNA进行琼脂糖凝胶电泳检测，目的在于检测28S和18S条带的完整性和它们的比值，或者是mRNA的完整性。一般认为，如果28S和18S条带明亮、边缘清晰，并且28S的亮度在18S条带的两倍以上，则RNA的质量较好。
（1）将洗净、干燥的电泳槽和模具，水平放置在工作台上。
（2）准确称取0.15g琼脂糖加入15mL 1×TAE中，摇匀，在微波炉内将琼脂糖溶液完全溶解，待冷却至60℃时，加入GoldView（终浓度为5μL/mL），充分混匀。
（3）插入适当的梳子，将温热的凝胶倒入胶模中，凝胶厚度为3～5mm，置于室温下凝固。
（4）待凝胶凝固后，小心移去梳子，将凝胶置于电泳槽中，加入电泳缓冲液，使液面高出凝胶1～2mm。
（5）用微量移液枪将样品与上样缓冲液混合，并将混合液小心加入上样孔内，同时加入合适分子质量范围的DNA分子质量标准作为对照。
（6）盖上电泳槽盖，调节电压100V，电泳30min左右。
（7）电泳完毕后将凝胶置于紫外透射检测仪上观察结果，用凝胶成像系统照相保存。
4.注意事项
（1）提取时要做到超净台内操作，操作戴一次性手套，EP管及Tip头都要用0.1%DEPC处理（0.1%DEPC浸泡过夜后，高压蒸汽灭菌），小心、细致晃动，每次移液要轻。这样做的目的有两个，一是小心RNase的污染，防止RNA降解；二是动作过度暴力会破坏RNA的完整性。
（2）一般RNA电泳应该是做甲醛变性电泳，但是一般的琼脂糖电泳也可以，需要上样量稍微大些，并且跑电泳的时间越短越好（这样也是为了减少外界RNase对RNA的降解）。跑完电泳立刻观察。
免责声明：以上内容源自网络，版权归原作者所有，如有侵犯您的原创版权请告知，我们将尽快删除相关内容。
