【摘要】：mecA基因是MRS特有的耐药基因，在其耐药性中起决定性的作用。葡萄球菌检出mecA基因或PBP2a蛋白即可定为MRS菌株。PCR 通过直接检测细菌染色体上的mecA基因来确认是否为MRS菌株，不受药敏试验条件的影响，具有快速、简便、特异性强和敏感性好的特点，是目前检测MRS菌株的金标准。图6-3-1PCR检测葡萄球菌中的mecA 基因1～12为临床分离菌株，P为mecA基因阳性对照，N 为阴性对照，M为分子量mar ker
mecA基因是MRS特有的耐药基因，在其耐药性中起决定性的作用。葡萄球菌检出mecA基因或PBP2a蛋白即可定为MRS菌株。PCR 通过直接检测细菌染色体上的mecA基因来确认是否为MRS菌株，不受药敏试验条件的影响，具有快速、简便、特异性强和敏感性好的特点，是目前检测MRS菌株的金标准。检测步骤如下。
1.煮沸法提取细菌DNA取过夜纯培养细菌单一菌落于500μl TE 缓冲液中，100℃加热13 min，10 000 r／min离心1 min，上清液即为PCR 反应的DNA模板。
2.PCR反应体系需50μl。其中，10×缓冲液（Buffer）5μl，d NTP 4μl，引物各1μl，DNA聚合酶0.25μl，无菌水36.75μl，DNA模板2μl。引物序列为：上游引物p1：5′-AAAATCGATGGTAAAGGTTGGC-3′，下游引物p2：5′-AGTTCTGCAGTAC CGGATTTGC-3′，PCR扩增产物片断大小为533 bp。
3.PCR反应条件①预变性：94℃×5 min；②循环：94℃×55 s，56℃×55 s，72℃×1 min，共30个循环；③延伸：72℃×10 min；④4℃保存。
4.PCR产物电泳1.2%琼脂糖凝胶，电压120 V，电泳时间40 min。最后经溴乙锭染色后在凝胶成像系统上阅读结果（图6-3-1）。(www.xing528.com)
图6-3-1 PCR检测葡萄球菌中的mecA 基因
1～12为临床分离菌株，P为mecA基因阳性对照，N 为阴性对照，M为分子量mar ker
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