超广谱β-内酰胺酶（Extended-spectru mβ-lactamases，ESBLs）主要包括TEM、SHV、CTX-M、PER和VEB等类型，每一类ESBLs可根据已报道的核酸序列设计通用引物进行PCR或多重PCR的检测，亦可直接根据相关资料所提供的引物序列直接合成用于耐药基因的检测，常用的引物如表6-4-1所示。检测步骤如下。
表6-4-1 检测ESBLs基因的引物序列及扩增片段长度
（续表）
1.煮沸法提取细菌DNA取过夜纯培养细菌单一菌落于500μl TE 缓冲液中，100℃加热13 min，10 000转／min离心1 min，上清液即为PCR反应的DNA模板。
2.PCR反应体系50μl。其中10×Buffer 5μl，d NTP 4μl，引物各1μl，DNA 聚合酶0.25μl，无菌水36.75μl，DNA模板2μl。
3.PCR反应条件(www.xing528.com)
（1）一般条件：①预变性：94℃×5 min；②循环：94℃×45 s，54℃×45 s，72℃×1 min，共30个循环；③延伸：72℃×10 min；④4℃保存。
（2）多重PCR检测CTX-M 型ESBLs基因的反应条件如下。①变性：94℃×5 min；②循环：94℃×25 s，52℃×40 s，72℃×50 s，共30个循环；③延伸：72℃×6 min；④4℃保存。
4.PCR产物电泳1.2%琼脂糖凝胶，电压120 V，电泳时间40 min。最后经溴乙锭染色后在凝胶成像系统上阅读结果。多重PCR检测CTX-M 型ESBLs的基因各引物所能检测到的各亚型基因，如图6-4-1和图6-4-2（下页）所示。
图6-4-1 多重PCR检测CTX-M 型ESBLs的基因
图6-4-2 多重PCR检测CTX-M 型ESBLs的基因各引物所能检测的各基因亚型
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