克林霉素耐药检测实用手册

大环内酯-林可酰胺-链阳霉素（macrolide-lincosamide-streptogramintype，MLS）类抗菌药包括大环内酯类、林可霉素类和链阳菌素类，是3类功能密切相关但结构不同的抗生素。MLS类抗菌药可抑制敏感细菌蛋白质的合成而抑制细菌生长。葡萄球菌对大环内酯类的耐药机制主要有两种，一是MS表型：由msrA基因编码的主动外排，导致对大环内酯类和B型链阳霉素耐药，但不耐克林霉素，即红霉素耐药而克林霉素敏感。二是大环内酯类、林可霉素类和B型链阳霉素（MLSB）固有表型：由erm基因编码导致核糖体靶位改变，引起对MLSB耐药。erm基因编码产生的甲基化酶可减低药物与rRNA 靶位的结合。若erm基因稳定表达，则表现对红霉素、克林霉素和其他MLS群成员耐药。但在某些情况下，erm基因需要诱导剂诱导才能表达对克林霉素耐药，否则体外试验可能会表现为对克林霉素敏感，而红霉素可作为这种诱导剂。菌株在体外表现对红霉素耐药而对克林霉素敏感，称为MLSB诱导表型：即红霉素耐药，克林霉素敏感（诱导耐药）。克林霉素诱导耐药的检测方法包括D试验法和肉汤微量稀释法。D试验由于操作相对简单而被临床微生物实验室广泛采用。

1.D试验　按标准的纸片扩散法进行操作，涂布0.5麦氏浊度单位菌悬液于MH 琼脂平板上，将红霉素（15μg）与克林霉素（2μg）纸片相邻放置，边缘相距15～26 mm。35℃空气环境下孵育16～18 h后阅读结果，在靠近红霉素纸片一侧的克林霉素抑菌圈出现截平现象（形状如大写的D 字），即为D 试验阳性，提示该菌株诱导克林霉素耐药阳性（图6-1-2）。如果克林霉素抑菌圈不出现D形现象，则D试验为阴性。

(www.xing528.com)

图6-1-2　D试验检测克林霉素诱导耐药：E为红霉素，另一为克林霉素

2.肉汤微量稀释法培养基为阳离子调节的MH肉汤（Cation-adjusted Mueller-Hinton broth，CAMHB），细菌接种菌量为5×105 CFU／ml，微量孔中的药物终浓度为：红霉素4μg／ml，克林霉素0.5μg／ml。35℃空气环境中孵育18～24 h后阅读结果。判断标准：微量孔中细菌生长即为D试验阳性，不生长为D试验阴性。