HPLC法主要用于复杂成分混合物的分离分析，由于HPLC分析样品的范围不受沸点、热稳定性、相对分子质量大小及有机化合物与无机化合物的限制，一般来说只要制成溶液就可分析。特别是HPLC可通过流动相的组成和配比的改变，使其分离效果大大提高，分析范围远比GC广泛。HPLC已广泛应用于药物分析、中药分析、环境分析、食品分析、农药残留、临床检验及药物动力学研究等诸多领域。
1.药物分析
HPLC在药物分析中，主要用于含量测定、鉴别与相关物质的检查等。对于极微量纳克级水平以上的绝大多数有机成分都能达到分离分析的要求。HPLC法是《中国药典》最重要的法定方法之一，而且应用逐版增加：2005版检查品种数142、测定品种数359；2010版检查品种数707、测定品种数694。
采用HPLC对体液中原形药物及其代谢产物的分离分析，无论在灵敏度、专属性及快速性等方面都有独特优势，已成为体内药物分析、药物动力学研究及临床检验的重要手段。由于常用的紫外检测器达不到灵敏度要求，采用HPLC-MS/MS联用研究也得到迅速发展。
2.中药分析
HPLC法对中药成分研究、含量测定及指纹图谱研究，已经成为不可或缺的重要手段。在《中国药典》中采用HPLC测定含量的品种，2005年版仅为505项，而2010年版则新增为1138项，足见其应用越来越广泛。对于成分复杂的中药成分分析，选用LC-MS联用技术更有利于识别其化学成分。
中药材与中药制剂的质量鉴定一直是影响中药现代化的瓶颈。中药指纹图谱用于中药与中药制剂的质量鉴定，已得到国家食品药品监督管理总局的重视，在国内外药学界也有广泛认同。中药指纹图谱的有关内容可查阅有关书籍（谢培山.中药指纹图谱.北京：人民卫生出版社，2005；中国药品生物制品检定所.常用中药标准物质分析图谱.北京：人民卫生出版社，2010）。
3.其它领域分析
HPLC在环境监测、食品安全、农药残留等方面应用广泛。如多环芳烃有致癌风险，其含量监测在食品分析与环境监测中有重要意义。2008年的三鹿奶粉事件对儿童的健康造成了非常严重影响，问题出在当时以测定氮含量来表征奶制品中的蛋白质含量，无法检测到非法加入的含氮量高达66.6%的三聚氰胺以提高奶制品氮含量的假象情况。目前对奶制品采用HPLC、LC-MS及HPEC等方法严格检测，确保上市奶制品的质量符合国家标准要求。
名词中英文对照
高效液相色谱法 high performance liquid chromatography，HPLC
液-固吸附色谱法 liquid-solid adsorption chromato graphy
液-液分配色谱法 liquid-liquid partition chromatography
离子色谱法 ion chromatography
分子排阻色谱法 molecular exclusion chromatography
化学键合色谱法 chemical Bond chromatography
亲和色谱法 affinity chromatography
胶束色谱法 micellar chromatography
手性色谱法 chiral chromatography
正相色谱 normal phase chromatography
反相色谱 reversed phase chromatography (www.xing528.com)
离子对色谱法 ion pair chromatography
离子抑制色谱法 ion suppression chromatography
手性固定相 chiral stationary phase
化学键合相 chemically bonded phase
溶剂强度参数 solvent strength parameters
溶解度参数 solubility parameter
溶剂极性参数 polarity parameter
溶剂黏度 solvent viscosity
正相洗脱 Positive phase elution
反相洗脱 Inverse elution
等度洗脱 isometric elution
梯度洗脱 gradient elution
输液泵 infusion pump
微量注射器 microsyringe
六通阀进样器 six-way valve injector
流通池 flow-through cell
二极管阵列检测器 diode array detector
荧光检测器 fluorescence detector
蒸发光散射检测器 evaporative light scatter-ing detector
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