1.色谱柱的结构
柱子的形状与材料 HPLC的色谱柱几乎都是直型管状柱，由不锈钢材料制成（选用316#不锈钢），管内壁要求具有很高的光洁度。直型柱既利于加工，又利于固定相填充。固定相采用匀浆法高压装柱，装柱压力80～100MPa。
柱子的连接与密封 HPLC色谱柱的填料，多采用细粒径以获得高分辨率。细粒填料的流体阻力往往很大，必须采用高压泵以将流动相强制输运通过柱子，这就要求柱子必须有良好的高压密封性能。所以，柱子两端的连接与密封尤为重要。除可以利用带密封垫或密封圈的螺纹连接外，通常使用带锥套的线密封连接方式（图10-17）。当旋紧连接螺钉或柱头螺帽，使锥套在压力下向上方移动时，其边缘会接触位于阳螺栓上的锥面，而锥面的角度稍大于锥套的角度。锥套前段边缘很薄，它在挤压下受到锥面向内的压力而形变并抱紧内管，与锥面接触会形成一圈环状的密封面，形成环线密封。这种由金属在高压力下形变而形成的密封十分紧密而可靠，在耐受很高压力的同时，又可造成很牢靠的机械连接，使其牢牢抱紧所箍套的柱管或连接管而不至于滑脱。
图10-17 色谱柱头的结构示意图
为保证可靠的连接，首先必须保证锥套的角度小于锥面的角度。否则，锥套前缘将不会与锥面接触而变形，形成环线密封。其次，锥套的前缘必须薄而有刃，否则它将难以形变。还有一点必须注意的是，与之配套的柱管的外圆应保持良好的圆柱形，与锥套的内径可以滑配，且表面应有很好的光洁度，不应有轴向划痕或沟槽。只有满足上述几点，才能获得良好的密封。这种环线密封方式既可用于色谱柱与柱头的连接，又可用于连接管路的连接。
锥套材料主要是不锈钢。近年来，聚醚醚酮（PEEK）和聚四氟乙烯（PTFE）管也被用于高、低压流路的连接，特别是PEEK管，可耐受近30MPa的压力，且化学稳定性亦好，因此，PEEK制的锥套也常用于管路的密封连接。
筛板及分配板 色谱柱的筛板也称滤网，是阻挡填料从色谱柱中流失的多孔网。它一般是用具有特定粒度的不锈钢粉末或镍粉在模型中烧结而成，颗粒的间隙即为筛板的孔，控制颗粒的大小即可得到不同的筛孔。筛孔应小于填料的直径。例如，对于粒径5μm的填料，使用1μm或2μm的筛板已敷应用。不锈钢筛板的标称孔径有0.2、0.45、1.0、5.0μm等。我国北京钢铁研究院生产并销售的色谱柱筛板已有多年历史，质量也满足应用。
2.色谱柱的使用和保养
新购买的商品HPLC色谱柱，在使用前应仔细阅读说明书，了解色谱柱的固定相性质，按照色谱柱标注的流动相流向装入流路中，然后以合适的纯流动相冲洗，使色谱柱达到平衡（监视画面的基线达到稳定），当分离分析实验完成后，再用纯流动相冲洗，使色谱柱的性能达到初始的性能，这就是色谱柱的再生。再生好的色谱柱从流路中取下后，将色谱柱两头的塑料堵头旋紧，以防止柱子中的流动相挥发干，然后放入盒中保存。(www.xing528.com)
值得注意的是，在使用酸性、碱性、缓冲溶液流动相后，一定要用适当的纯溶剂冲洗，直到色谱柱恢复平衡状态，以提高色谱柱的使用寿命。
3.色谱柱效评价
新柱在使用前应进行柱效评价实验，以确定色谱柱是否达到规定的要求。柱效评价的推荐条件为流动相流速1mL/min，检测波长254nm，进样量10μL。死时间测定，反相色谱柱用磺酸钠水溶液，正相色谱柱用四氯乙烯。色谱柱的柱效指标，见表10-9。
表10-9 色谱柱的柱效指标
一些色谱柱的柱效评价与相应的标准样品和流动相条件，参见表10-10。
表10-10 一些色谱柱与相应的样品和流动相条件
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