色谱法简介-仪器分析

色谱法是一种分离分析方法。它是利用各物质在两相中具有不同的分配系数，当两相做相对运动时，这些物质因在两相中进行多次反复分配的差异来达到分离的目的。

色谱法是由俄国植物学家M.Tsweet于1906年发现提出的。Tsweet想把植物色素提取液中的各种色素分离开来，做了如下实验：在一根玻璃长管中装入干燥的固体活性碳酸钙，将少量的植物提取液加入玻璃管的上端，然后用石油醚自上而下流过，在石油醚的不断冲洗下，在玻璃管上端的色素混合液向下移动。经过一段时间后，他惊奇地发现，在玻璃管的不同部位出现了不同颜色的清晰色带。在石油醚的不断冲洗下，当不同色带流出玻璃管时，用容器分别承接，就得到需要的不同色素纯组分。Tsweet将这种分离方法命名为色谱法。因此后人尊称Tsweet为色谱之父。

在Tsweet的植物色素分离实验中，活性碳酸钙被称为固定相，石油醚称为流动相，玻璃管称为色谱柱。由于叶绿素、叶黄素和β-胡萝卜素的结构和性质都比较相近，差别微小，采用传统分离方法是无法将它们分离的。但它们总归还是有差别的，活性碳酸钙对它们的吸附作用力大小是不同，导致它们向下移动的速度不同。与固定相作用力大的组分移行速率就稍慢一些，与固定相作用力小的组分移行速率就稍快一些，形成差速移行，在流动相石油醚的不断冲洗下，这种差异在移行动态中被累加放大。如果不同组分经过移行相同的距离，移行快的组分耗时少，先流出色谱柱；移行慢的组分耗时多，后流出色谱柱，导致它们在出柱时间上先后的分离（柱色谱）。如果它们经过移行相同的时间，移行快的组分移行距离长；移行慢的组分移行距离短，导致它们在空间距离上的分离（平面色谱）。所以，色谱分离过程实际上是一种将不同组分的微小差别在动态中累积放大的过程。(www.xing528.com)

Tsweet的色谱实验方法是经典液相色谱法，对色素的分离过程与其含量测定过程是离线的。现代色谱法的分离过程与其含量测定过程是在线的。