【摘要】:蛋白质分子质量大于108Da者可用普通型离心机和高速型离心机,分子质量在106~108Da者可选用超速型和超高速型离心机,分子质量小于106Da者,用离心效果不好,应改用其他分离方法。如果两种蛋白质的沉降系数相差一个数量级(10倍)以上,可用差速离心反复多次以达到分离效果。如果两种蛋白质沉降系数相差不到一个数量级,那么用差速离心很难奏效,此时,若改用密度梯度离心技术,便可获得比较满意的分离效果。
蛋白质分子在其溶液中能够运动和扩散,同时它受重力场的作用还有沉降的趋势,分子越大越重,扩散越慢而沉降越快;反之,分子越小越易扩散但沉降则越慢,甚至不能自然沉降。因此,需借助离心力场,外加各种密度的介质使蛋白质沉淀,以达到分离的目的。
常用的离心手段为离心机,按转速(r/min)可分为普通型(500~4000r/min)离心机、高速型(8000~25000r/min)离心机、超速型(25000~80000r/min)离心机和超高速型(150000r/min)离心机。蛋白质分子质量大于108Da者可用普通型离心机和高速型离心机,分子质量在106~108Da者可选用超速型和超高速型离心机,分子质量小于106Da者,用离心效果不好,应改用其他分离方法。
如果两种蛋白质的沉降系数相差一个数量级(10倍)以上,可用差速离心反复多次以达到分离效果。如果两种蛋白质沉降系数相差不到一个数量级,那么用差速离心很难奏效,此时,若改用密度梯度离心技术,便可获得比较满意的分离效果。(www.xing528.com)
密度梯度离心,是指离心时离心管中的介质是不均一的 ,从近中心到远中心密度不断增加形成梯度。常用的梯度介质有甘油、蔗糖、溴化钾、氯化铯。选用介质要注意浮力的密度范围,被分离的蛋白质密度不能大于介质的最大密度,而且所选介质不能影响蛋白质的活性,不腐蚀转头和离心管,另外,价格要低廉,回收要方便等。
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