细胞培养污染的控制：生命科学基础研究入门

超净工作台和培养室的紫外消毒。无菌操作实验前，无菌室、无菌操作台及所有的高温高压灭菌后的器材，都应进行紫外灯照射至少30min，以杀灭物体表面细菌，紫外灯照射完毕后，开启鼓风机，吹台10min，以减少紫外照射后有害气体对人体的伤害，实验人员必须穿戴无菌手套及衣帽，先将无菌操作台面用沾有75%乙醇溶液的脱脂棉擦拭，然后再开始实验操作。假如每次操作只进行一种细胞处理，不能多种细胞同时操作，不共享培养基，以避免细胞间污染。实验完毕后，将实验物品带出工作台，用75%乙醇溶液擦拭台面及用具操作间隔10min以上，才能再进行下一种细胞的操作。

细胞培养所用器皿消毒。无菌室应达到相应无菌条件，通风温控设备保持正常运转。无菌操作台应保持清洁及宽敞，除每次实验必要物品仪器，如试管架、移液器或吸管盒等可以暂时放置，其他实验用品用完应立即移出，以利于操作顺畅及气体流通。实验用品表面应用70%乙醇溶液擦拭后才能放入无菌操作台。操作过程应在台中央无菌区。

实验人员在实验过程中的无菌操作小心从无菌器中取实验物品随取随盖，避免造成污染。使用移液器时，勿碰触吸管尖部或容器瓶口。整个操作手或仪器不要在打开的容器上方经过。容器打开后，紧握瓶身，倾斜约45°打开瓶盖，勿将盖口朝上放置。

实验过程中的安全防护措施。在实验过程中，实验者应注意自身安全，穿戴好实验衣帽、口罩及手套。对于来自人类或病毒感染细胞株应特别小心，实验完毕后的废物废液应经过正规处理后再倾倒。操作过程中，应避免引起有毒气体溢出，使用毒性药品时，如DMSO应避免尖锐针头刺伤。(www.xing528.com)

定期检测下列项目。二氧化碳钢瓶气压检测及氧压计中无菌水的定期更换；培养箱二氧化碳浓度、温度及湿度的监控，培养箱中水盆中定期更换灭菌水，可添加消毒剂（Zephrin1：750）；无菌操作台内气流压监控；定期更换紫外灯管、HEPA过滤膜及欲滤网。

培养基的无菌保存时间。粉末培养基配制好后，过滤除菌，分装密封于4℃的温度下保存，加人血清后，使用周期尽量不要超过1个月，-20℃存放也不要超过3～4个月。存放时间过长的培养基，虽然对永生化的细胞株生长影响不大，但对原代细胞或一些培养条件苛刻的细胞，培养基放置时间过长会严重影响起生长。

细胞培养时所需物品的准备。为避免培养基及试剂在接触细胞时对细胞造成伤害，实验前我们需将试剂预热至适宜细胞生长的37℃。实验者可在紫外照操作台期间，将培养基、消化酶、细胞润洗缓冲液从冰箱拿到室外，使其自然升温。如果使用37℃水浴锅预热，一定要注意水浴锅的清洁，应每隔一个星期至半个月更换水箱中的水，避免水箱滋生、吸附大量细菌。试剂瓶从水浴锅拿出后，用干净清洁的毛巾擦干试剂瓶表面的水，擦拭过乙醇溶液后方可置于操作台中。