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分子生物学实验:试剂配制方法

时间:2023-10-29 理论教育 版权反馈
【摘要】:加水定容至200mL,摇匀,溶解后调节pH值至8.0,加20μLDEPC,混匀后置于37℃烘箱12 h后灭菌,冷却,4℃保存。用HCl调pH值至7.4,灭菌后1000∶1加入Tween-20。加热至70℃使之完全溶解,分装冷却保存于-20℃。④50%甲酰胺2×SSC。⑦地高辛抗体溶液。

分子生物学实验:试剂配制方法

1.杂交第一天的药品

配制药品前所有瓶子于200℃烘烤3 h,瓶盖泡于新配制的DEPC水中,24 h后高压灭菌。

(1)DEPC水。

DEPC:蒸馏水=1∶1000,混匀后置于37℃烘箱12 h后灭菌,冷却,4℃保存。

(2)1mol/LTris-HCI(pH值为8.0)。

用浓HCI调节pH值至8.0,4℃保存。

(3)0.5mol/LEDTA(pH值为8.0)。

加水定容至200mL,摇匀,溶解后调节pH值至8.0,加20μLDEPC,混匀后置于37℃烘箱12 h后灭菌,冷却,4℃保存。

(4)1mol/L甘氨酸。

加水定容至100mL,加100μLDEPC,混匀后置于37℃烘箱12 h后灭菌,冷却,4℃保存。

(5)20×SSC(pH值为7.0)。

在400mL水中溶解后,用HCI和NaOH调节pH值至7.0,加水定容至500mL,加500 μLDEPC,混匀后置于37℃烘箱12 h后灭菌,冷却,4℃保存。

(6)杂交buffer。

分装于lmL管中-20℃保存。

(7)配制工作溶液。

①蛋白酶K buffer。

加DEPC水定容至120mL。

②甘氨酸buffer。

加DEPC水定容至40mL。

③乙酰化buffer。

加DEPC水定容至80mL。

④2×SSC。

加水至40mL。

2.杂交第二天的药品

(1)20×SSC(pH值为7.0)。

加水定容至500mL溶解后,用HCl和NaOH调节pH值至7.0,灭菌后4℃保存。

(2)1mol/LTris-HCI(pH值为8.0)。

加水定容至500mL,用浓HCl调节pH值至8.0,4℃保存。

(3)0.5mol/LEDTA(pH值为8.0)。

加水定容至200mL,溶解后调节pH值至8.0,灭菌后4℃保存。

(4)lmol/L马来酸。(www.xing528.com)

加水定容至1L,灭菌后4℃保存。

(5)5mol/LNaCl。

加水定容至100mL,灭菌后4℃保存。

(6)MBST。

加水至500mL,用lmol/L马来酸和NaOH调节pH值至7.5,4℃保存。

(7)0.2mol/L左旋咪唑

用HCl调pH值至7.4,灭菌后1000∶1加入Tween-20。

(8)2%封阻液(blocking solution)。

加热至70℃使之完全溶解,分装冷却保存于-20℃。

(9)配置工作溶液。

①5×SSC。

加水定容至160mL。

②2×SSC。

加水定容至40mL。

③0.1×SSC。

加水定容至80mL。

④50%甲酰胺2×SSC。

加水定容至80mL。

⑤NTE。

加水定容至120mL。

⑥预封阻液。

⑦地高辛抗体溶液。

3.杂交第三天的药品

(1)1mol/LTris-HCI(pH值为9.5)。

加水定容至500mL,用浓HCI调节pH值至9.5,4℃保存。

(2)lmol/LMgCl2

加水定容至500mL,高压灭菌备用。

(3)配置工作溶液:NTMT。

加水定容至500mL。

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