1.杂交第一天的药品
配制药品前所有瓶子于200℃烘烤3 h,瓶盖泡于新配制的DEPC水中,24 h后高压灭菌。
(1)DEPC水。
DEPC:蒸馏水=1∶1000,混匀后置于37℃烘箱12 h后灭菌,冷却,4℃保存。
(2)1mol/LTris-HCI(pH值为8.0)。
用浓HCI调节pH值至8.0,4℃保存。
(3)0.5mol/LEDTA(pH值为8.0)。
加水定容至200mL,摇匀,溶解后调节pH值至8.0,加20μLDEPC,混匀后置于37℃烘箱12 h后灭菌,冷却,4℃保存。
(4)1mol/L甘氨酸。
加水定容至100mL,加100μLDEPC,混匀后置于37℃烘箱12 h后灭菌,冷却,4℃保存。
(5)20×SSC(pH值为7.0)。
在400mL水中溶解后,用HCI和NaOH调节pH值至7.0,加水定容至500mL,加500 μLDEPC,混匀后置于37℃烘箱12 h后灭菌,冷却,4℃保存。
(6)杂交buffer。
分装于lmL管中-20℃保存。
(7)配制工作溶液。
①蛋白酶K buffer。
加DEPC水定容至120mL。
②甘氨酸buffer。
加DEPC水定容至40mL。
③乙酰化buffer。
加DEPC水定容至80mL。
④2×SSC。
加水至40mL。
2.杂交第二天的药品
(1)20×SSC(pH值为7.0)。
加水定容至500mL溶解后,用HCl和NaOH调节pH值至7.0,灭菌后4℃保存。
(2)1mol/LTris-HCI(pH值为8.0)。
加水定容至500mL,用浓HCl调节pH值至8.0,4℃保存。
(3)0.5mol/LEDTA(pH值为8.0)。
加水定容至200mL,溶解后调节pH值至8.0,灭菌后4℃保存。
(4)lmol/L马来酸。(www.xing528.com)
加水定容至1L,灭菌后4℃保存。
(5)5mol/LNaCl。
加水定容至100mL,灭菌后4℃保存。
(6)MBST。
加水至500mL,用lmol/L马来酸和NaOH调节pH值至7.5,4℃保存。
(7)0.2mol/L左旋咪唑。
用HCl调pH值至7.4,灭菌后1000∶1加入Tween-20。
(8)2%封阻液(blocking solution)。
加热至70℃使之完全溶解,分装冷却保存于-20℃。
(9)配置工作溶液。
①5×SSC。
加水定容至160mL。
②2×SSC。
加水定容至40mL。
③0.1×SSC。
加水定容至80mL。
④50%甲酰胺2×SSC。
加水定容至80mL。
⑤NTE。
加水定容至120mL。
⑥预封阻液。
⑦地高辛抗体溶液。
3.杂交第三天的药品
(1)1mol/LTris-HCI(pH值为9.5)。
加水定容至500mL,用浓HCI调节pH值至9.5,4℃保存。
(2)lmol/LMgCl2。
加水定容至500mL,高压灭菌备用。
(3)配置工作溶液:NTMT。
加水定容至500mL。
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