Trizol提取RNA实验步骤及保存方法

（1）样品处理：对动物（如小鼠）采取安乐死后尽快摘取肝组织。取50～100mg组织（一般采用新鲜组织，也可将新鲜组织快速在-70℃或液氮中冷冻保存备用）置于1.5mL离心管中，加入lmLTrizol，再用微量组织匀浆器充分匀浆。匀浆完成后室温下静置5min。

（2）在匀浆液中加入0.2mL氯仿，剧烈振荡15 s，然后冰上静置2min。

（3）用高速离心机4℃离心，条件为13 000 g、15min，离心后离心管中的样品出现清晰的三层，自上而下为水相、中间层和有机相。RNA处于水相层，取出上层的水相（0.5～0.7 mL）。在做此步操作时，尽可能不要触及中间层。图2-1为以上各步骤示意及样品分相的状态。

图2-1　Trizol提取RNA分相示意图

（4）将上层水相转移至新的离心管中，加入等体积的异丙醇（0.5～0.7mL），将管中液体上下轻轻混匀，静置于低温（-20℃）20min以上（时间越长，沉淀效果更好）。

（5）将上述混合液4℃离心，条件为13 000 g、10min。离心后离心管底部将出现白色RNA沉淀物，此时弃上清液。(www.xing528.com)

（6）向离心管中加入1mL 75%乙醇，用200μL枪头将沉淀击碎，并混匀数次，于4℃再次进行离心，13 000 g、5min。离心后弃上清液。

（7）向含沉淀物的离心管中加入lmL 100%乙醇，上下混匀数次，以洗涤RNA沉淀物。

（8）如不需立即进行后续实验操作，可将溶于100%乙醇中的RNA置于-20℃保存。如需继续进行实验，可再次离心，弃上清液后适度晾干。

注意：不要过于干燥，那样反而不易使RNA溶解。

（9）向干燥的RNA沉淀中加入适量无RNA酶的水溶解，可采用移液枪上下吹打来加快溶解，也可在65℃加热数分钟助溶。

（10）取一定量的RNA溶液，NanoDrp 2000C紫外分光光度计定量测定。