如何正确安装使用显微镜？

（一）显微镜的基本结构

光学显微镜由机械部分和光学系统两大部分组成（图2-1，图2-2）。

图2-1　显微镜的结构示意图

图2-2　内置光源的双筒显微镜

1.机械装置

（1）镜座　位于显微镜底部，用来支持整个镜体，使显微镜放置稳固。含内置照明系统的显微镜，其电源变压器、调压器和光源均安装在镜座内。

（2）镜臂　是固定镜筒的结构，下连镜座，上连镜筒，也是取放显微镜时手握的部位。镜臂有固定式和活动式两种，现在主要为固定式。

（3）镜筒　筒状结构，上接目镜，下连物镜转换器。镜筒有单筒和双筒两种。双筒中的一个或两个目镜接头处有屈光度调节装置（视度圈），用于两眼视力不同时调节；两目镜的相对距离也可根据观察者的两眼瞳距而调节。

（4）物镜转换器　为一个连在镜筒下方的可以转动的圆盘，其上一般可安装3～4个物镜，转动旋转器可换用不同放大倍数的物镜。

（5）载物台　又称镜台，是载放标本的地方，其中央有一个通光孔，以通过照明光线，照亮标本。载物台上装有标本固定器，老式显微镜的固定器是两个金属弹性压片，现在的显微镜是标本移动器，既能固定标本，也能移动标本的位置，便于观察。移动器上有标尺，根据上面的刻度，可确定标本的位置。

（6）调焦装置　是调节物镜与标本间距离的装置，位于镜臂上。有粗调焦器和微调焦器两种，利用它们可使物镜或载物台上下移动，以得到清晰的图像。现在的显微镜的粗调焦器和微调焦器是共轴式的，两者组合在一起，外圈粗的螺旋为粗调焦器，中央细的为微调焦器。

（7）聚光器调节旋钮　在镜臂的一侧，旋转它，可使位于载物台通光孔下方的聚光器的位置上下移动，以改变光线的入射角度，调节光的强度。

2.光学系统

由成像系统和照明系统组成。成像系统包括物镜和目镜，照明系统包括光源（自然光用反光镜，内光源用照明灯泡）、聚光器等。

（1）物镜　安装在镜筒下端的物镜转换器上，因接近被观察的物体而称接物镜，简称物镜。物镜是决定成像质量和分辨能力的主要部件，其作用是将物体作第一次放大，其成像是一个放大的倒立的实像。

物镜的性能可以以物镜外壳上标示的数值口径（Numerical Aperture，简写NA）大小来表示。NA是指物镜前透镜与被检物体之间的折射率（η）和镜口角（α，图2-3）一半的正弦值的乘积，用公式表示为：

图2-3　物镜的镜口角

NA=ηsin（α/2）

NA的大小是衡量一台显微镜分辨率强弱的依据。分辨率是指显微镜分辨两物体之间最小距离的能力，用S表示。S与NA及光波波长（λ）有关，用公式表示为：

S=λ/（2·NA）

可见，NA越大，λ值越小，则S值越小，分辨率越高。提高分辨率的措施有：

①选择波长较短的光源：在使用可见光做光源时，可加蓝色滤光片。可见光的光波波长限制了显微镜的分辨率的提高，主要是因为当两点之间的距离小到一定程度时（与波长相关），这两点上发出的光就会发生干涉现象，从而无法分辨出这两点。

②增大物镜的镜口角α：但α的极限值为180°。

③增加介质折射率η：改变折射率可明显改变NA的值（空气的折射率为1.0，水的为1.33，玻璃的为1.52，香柏油的为1.51）。

根据物镜与被检物之间可使用的介质不同，可将物镜分为干燥系物镜和油浸系物镜。

干燥系物镜：以空气为介质，NA＜1。

油浸系物镜：以香柏油或石蜡油为介质，这种物镜又叫油镜，NA＞1。油镜上一般有“OIL”或“OEL”字样。

物镜外壳上还有其他参数，如“40/0.65，160/0.17”，它们分别表示放大倍数（40×）、数值口径（0.65）、物镜所要求的镜筒长度（160 cm）和盖玻片的厚度（0.17 mm）。

（2）目镜　装于镜筒上端，由两块透镜组成，上端的称“接目镜”，下端的称“场镜”。上下透镜之间或在两个透镜的下方，装有由金属制成的环状光阑，或称“视场光阑”，物镜放大后的像就落在视场光阑平面处，其上可安放目镜测微尺。

目镜的作用是将物镜放大所成的像再次放大，但不增加分辨率。目镜上标有5×、10×、16×等放大倍数，可根据需要选用。

（3）聚光器　也叫集光器，安装在显微镜载物台下，一般由2到3块凸透镜组成。其功能是将从光源射来的平行光线集中在一点，以增强照明亮度，使物像清晰，提高分辨率。聚光器由聚光镜和可变光阑组成。聚光镜的数值口径是其主要参数，它有一定的可变范围，但原则上与物镜的数值口径一致。聚光镜的数值口径在一定范围内可通过可变光阑加以调节，以适应不同物镜的需要。可变光阑也叫光圈或孔径光阑，其作用是控制光束的大小，调节光强度和使聚光镜的数据口径与物镜的数值口径相适应。可变光阑的开大和缩小影响着成像的分辨率和反差，应随物镜的转换来调节，避免散射光的干扰。在可变光阑的下面，还装有一个滤光片托架，可放置滤光片，改变光线成分，提高镜检效果。聚光器的高度可以上下调节，以使焦点落在被检物体上，得到最适亮度。

（4）反光镜和内照明灯泡　反光镜是普通显微镜的采光设备。它常有两个面，一面是平面镜，一面是凹面镜，安装在弧弓上，可自由翻转，以使光线射向聚光器，光线强时用平面镜，光线弱时用凹面镜。内置光源的显微镜可不用反光镜或没有反光镜，而在镜座上设有照明灯泡和集光器。

（二）光学显微镜的成像原理(www.xing528.com)

显微镜的物镜和目镜各由若干片透镜组成，但可以看成是一个凸透镜。根据凸透镜成像原理，光线自聚光器向上透过实验标本（标本应是透明的）进入物镜，然后在目镜的焦点平面（光阑部位）形成了一个经第一次放大的倒置实像。此像经过目镜的进一步放大到达眼球视网膜。这样，我们最后看到的物像，是经两次放大的、方向相反的倒置虚像。自眼球到放大虚像间的距离叫明视距离，其长度为250 mm，这是明视野普通显微镜中物像的最适距离。

显微镜的总放大倍数是目镜的放大倍数与物镜放大倍数的乘积。

（三）显微镜的使用

1.取镜与放置

从镜盒中取出显微镜。取镜时右手握住镜臂，左手托住镜座，保持镜体直立，不可倾斜，禁止单手提镜。放置桌上时，动作要轻，一般应放在座位左侧，距桌边5～6 cm处，以便于观察和绘图记录及防止掉落。在移动显微镜时不要拖动。

2.光轴对正

照明光束应与显微镜的光轴合一，使光线均匀地照明视场。镜检前，光路要合轴调整，使照明光束与显微镜的光轴在同一轴线上。光路系统中的目镜、物镜和视场光阑位置固定，仅聚光器可调。因此，光路合轴实为聚光器和光源的调中。

采用反光镜采外光源时，一般用由窗口进入室内的散射光或用日光灯作为光源。对光时，转动聚光器的升降旋钮，把聚光器升至最高位置，用低倍物镜正对通光孔，然后从目镜向下注视，同时转动反光镜，使光线反射入视野，然后用聚光器调节光的强度，使视野中的光线均匀、明亮但不刺眼。

采用镜内光源时，只需要接通电源，打开开关，即可通过调节灯泡亮度来调节光的强度。

3.标本观察

在光轴对正后，把标本放在载物台上，夹好载玻片，使标本位于正对通光孔中央的位置，然后进行观察。

观察任何标本都必须按物镜放大倍数由低到高的顺序进行，先用低倍镜观察。因为低倍镜视野大，易于发现和确定观察目标。找到要观察的目标后，再将目标移至视野中央，换用高倍镜观察。

（1）低倍镜的使用

①调整焦距：两眼从侧面注视物镜，慢慢转动粗调旋钮，使镜筒徐徐下降或载物台慢慢上升，直至物镜距载玻片5 mm处。然后通过目镜观察视野，并同时使镜筒缓缓上升或载物台慢慢下降，直到看清物像为止（注意：不要反向操作，以免压碎玻片，损伤物镜）。如果一次调节没看到物像，应重复上述操作，直到看到物像并且清晰为止。为了使物像更清晰，可转动微调旋钮，直至物像最清晰为止。

目前新式的显微镜，可以通过移动载物台来调焦，其聚焦点往往就是载物台所能移动的最大距离处，因此调焦时，只需要上移载物台至不能动处，即可看到物像，然后调节微调旋钮至物像最清晰。

②低倍镜观察：焦点调好后，可根据情况调节聚光器，使视野亮度、反差适宜，然后根据标本材料的厚薄、颜色等移动玻片，将要观察的最理想的部分移到视野中央进行观察。

（2）高倍镜的使用　在低倍镜的基础上，将要进一步观察的目标移至视野正中央，然后移动物镜转换器，将低倍物镜换成高倍物镜。若物镜转换时压到玻片，应先将镜筒提起或降低镜台，再转换镜头，然后将镜筒慢慢下降或升高载物台，直至物镜头几乎与玻片接触为止，然后一边通过目镜观察，一边转动粗调旋钮使镜台缓慢下降或镜筒慢慢上升，拉大物镜与标本之间的距离，直到看见物像，然后用微调旋钮调节至物像清晰。不可反向操作。

能将高倍镜直接转换过来的，只需用微调旋钮略微调节，即可看清目标。

用高倍镜观察时视野变小，亮度减弱，要重新调节视野亮度及聚光器通光孔径。

（3）油镜的使用　在高倍镜观察的基础上，可用油镜进一步观察标本的细微结构。因为油镜工作距离非常短（一般在0.2 mm之内），因此使用油镜时要特别细心，必须按下列步骤操作。

①在高倍镜下，将所要观察的目标移至视野中央。

②用粗调旋钮将镜筒提升（或将载物台下降）约2 cm，再转换油镜至通光孔位置。

③在玻片上被光线照亮的部位滴一滴香柏油。

④从侧面注视着，用粗调节旋钮将镜筒缓慢地下降（或载物台升起），使油镜浸入油中，并使镜头前透镜达到几乎接触玻片但不接触的位置。

⑤从接目镜观察，同时调节聚光器使视野亮度和反差适中，然后用粗调将镜筒向上慢慢提起（或镜台缓慢下降），拉大镜头与标本之间的距离。绝不能反向操作！当物像出现后改用微调调至物像最清晰。如果油镜镜头已离开油面而仍未见到物像，则应重复上述操作，直至看到物像为止。

⑥观察完毕，提升镜筒（或降下镜台），转动物镜转换器，使油镜偏位，然后用一张擦镜纸擦去镜头上的油，再用一张擦镜纸蘸少许二甲苯擦去镜头上残留的油迹，最后用一张擦镜纸擦去剩余的二甲苯（玻片上油的擦拭也可照此进行）。

4.使用后整理

观察完毕，将各部分还原，转动物镜转换器，使物镜头不与通光孔相对，而是成八字形位置，再下降至最低，降下聚光器，反光镜与聚光器垂直，用纱布清洁镜台等机械部分，然后将显微镜放回。

（四）使用显微镜应注意的问题

1.显微镜是精密仪器，使用时一定要严格按规程进行操作。

2.要随时保持显微镜的清洁，不用时罩好，及时收回盒内。机械部分若有灰尘污垢，可用软纱布擦拭。光学部分若有污垢，须用毛刷拂去或用吸球吹去灰尘，再用擦镜纸轻轻擦拭，或蘸二甲苯擦拭。擦拭时由透镜中心向外擦拭，切忌用手指、纱布或其他粗硬材料擦抹。

3.在使用单筒显微镜时，必须两眼睁开（一眼观察，一眼绘图），切勿紧闭一眼。

4.标本一般需加盖盖玻片观察，制作带水或带药液的玻片标本时，必须先把两面擦干，再放到水平镜台上观察。

5.如遇机件不灵或使用困难时，切不可用力扭动或自行处理，应立即报告老师。

6.注意防潮。