传统医学微生态学研究方法实用指南

医学微生态学的研究方法主要有显微镜检查、培养、生化代谢以及细菌计数等。其中，显微镜检查在内的直接检查法因其快速、简便和低成本，是直接获取标本中微生物信息的有效手段，目前在微生态学研究中仍然为首选方法。

（一）显微镜检查法

利用普通显微镜计数法、荧光染色直接计数法、电镜观察法和免疫电子显微镜等对标本中的微生物进行检测，可直接观察细菌形态、分布等。微生态学检测方法中一个重要原则是定性、定量和定位检查。标本质量对观察结果有很大影响，一般根据研究和检测的生境不同，对不同生境采取不同的取样方法。就生境的定位来说，宜根据研究和检测的生境不同，先对生境进行层次化定位。人体六大微生态系统，根据分析的要求不同，应分不同层次对不同生境取样，原则是不污染非定位菌群并反映所研究对象生境的自然状态。

（二）分离培养方法(https://www.xing528.com)

对细菌的分离培养是采用各种选择性培养基培养细菌，将各种细菌分离并根据染色、形态、生化反应及血清学反应等生物学特性进行鉴定，同时可通过倍比稀释和菌落计数来测定活菌数量。此方法比较成熟，目前依然是肠道微生物群研究的重要方法。与其他方法相比，该方法对某一生境中获得的细菌菌株进行培养有助于全面、完整地研究细菌的功能和不同生长条件下的生理活性，也有助于理解肠道微生态系统中各种细菌对营养成分的利用情况和各种细菌之间的相互作用。

但是，对细菌的分离培养仍然存在明显的缺陷，那就是现有的方法只能对部分菌群进行分析，尚无法对自然界中有90%～99%的微生物进行培养，肠道中可培养微生物所占比例也相当小。只对部分菌群进行分析显然存在明显的局限性，不能反映整个微生态系与疾病发生发展的关系。而且，该方法耗时、费力，无法满足对于种类、数量巨大的肠道微生物群的研究需要。

自21世纪初以来，人们对微生物多样性的估计已经发生了巨大变化，逐渐认识到未培养菌所占比例还相当巨大，而这些“丢失”的物种非常重要，因为它们可能在人体微生物群落的功能方面发挥重要的作用。因此，仍然需要充分利用现代生物学技术、计算机建模技术等对分离培养技术进行改进。如改善原位培养富集方法；筛选更有针对性的选择药物或发明更好的分离技术；模拟人体肠道微环境，为目的微生物提供“原生的”生长环境，发展“仿生培养系统”。如果这些问题解决特别是后者得到突破，细菌培养研究技术将会得到新的发展。