快速掌握植物组织徒手切片技术

以植物材料（如根、茎等）为对象，采用一定的方法将其切成极薄的薄片，再经过处理就可以采用植物组织切片技术研究植物的微观结构。植物组织切片技术的方法有徒手切片法、石蜡切片法、冷冻切片法等。徒手切片法是指用刀片或剃刀将新鲜的或固定的植物材料切成薄片，制成装片的方法，可制成临时装片，也可通过脱水与染色制成永久制片，其优点是简单、方便、节省时间和资金，而且保留了植物活体的状态和色彩，很有实用价值。因此熟练掌握此种方法，对教学和科研都很重要。

1.取材

为便于手持和切片，选取实验材料中软硬适中的部分，一般以长2～3 cm、切片断面不超过3～5 mm2为宜。具体操作前，也可将马铃薯块茎切成适合的条状进行练习。

2.切片

用左手拇指、食指和中指拿住材料，拇指略低于食指与中指，并使材料略微突出在指尖上面。右手持刀，将刀片平稳地放在左手食指之上，与材料切面平行，然后以均匀的动作，自左前方向右后方，斜着向后拉切，切时用臂力而不用腕力，材料应一次性切下，最忌拉锯式切割。切下许多薄片后，用湿毛笔（或润湿的手指头）将这些薄片放入培养皿中。

3.选片与固定

用毛笔挑选透明的薄片，放在载玻片上，排列成2行，依次在低倍镜下进行观察。凡厚薄均匀、切面完整、各组织结构能分辨清楚的切片，就可以选用。选定的切片移入盛有70%酒精的培养皿中固定。固定好的材料即可作临时装片观察，也可制作成永久切片。

4.制作永久切片

固定好的切片，经染色、脱水、透明和封片，就可以制作成永久切片。

①染色：倾去固定切片的固定液，加入番红酒精液，将切片染色1.5 h以上。

②清洗：用50%酒精洗去过多的染料，时间5 min。

③脱水：用75%、85%、95%梯度酒精脱去材料中的水分，每级时间5 min。

④复染：用固绿酒精液进行复染，时间1～2 min，然后用95%酒精洗去过多的染料。

⑤脱水：用纯酒精连续脱水2次，使材料绝对无水，每次5 min。

⑥透明：用1/2无水酒精+1/2二甲苯，透明5 min；再用纯二甲苯透明2次，各5 min。(www.xing528.com)

⑦封片：将已透明的切片，迅速放到无水的载玻片中央，立即滴上1滴加拿大树胶或光学树脂，盖上盖玻片（注意不要产生气泡），平置1 d使其自然封固（也可置于30～35℃恒温箱中烘干）。

5.观察

待装片封固完成后在显微镜下进行观察。此种方法染色的结果是木质化的细胞壁及细胞核被染成红色，韧皮部和其他纤维素细胞被染成绿色或蓝绿色。

6.练习

取不同的材料，如牛膝（Achyranthes bidentata Blume）或空心莲子草[Alternanthera philoxeroides（Mart.）Griseb.]的茎进行练习，尤其是切片的操作。观察和对照不同材料制成的切片，归纳和总结植物组织的结构特点。

注：条件许可的也可学习利用滑动切片机进行制片。

复习思考题

1.绘各种类型的导管分子形态图。

2.绘各种类型的管胞形态图。

3.绘厚角组织部分横切面结构图。

4.厚角组织与厚壁组织有何不同？

5.植物的分生组织有哪几种类型？它们在植物体内的分布位置如何？

6.薄壁组织有什么特点？它对植物的生活有什么意义？

7.各种成熟组织都来自分生组织，为什么它们之间存在如此大的差异？