固定液一般有防腐和保存的作用,用固定液固定植物细胞或植物整体标本,能保存植物体内细胞的形态、结构及其组成,尽量使其近于生活状态。固定液分为单纯固定液和混合固定液。单纯固定液中最重要的有乙醇、福尔马林、醋酸、苦味酸、铬酸、重铬酸钾、氯化汞等,优点是配制简便,缺点是有一定的局限性,不易达到理想的固定要求。混合固定液由不同的药液按一定的比例混合而成,使各自的优缺点相互补充,其制备虽比较麻烦,但固定效果比较好。常用的混合固定液有醋酸-酒精混合液、福尔马林-醋酸-酒精液、包因氏固定液等。下面介绍几种常见固定液的配制方法。
1.福尔马林(甲醛)
配方
福尔马林固定液常用的浓度是5%~10%(质量分数,同类的后同)。在配制福尔马林固定液时,通常将37%~40%的甲醛作为溶质来配。例如配制5%福尔马林是取市售37%~40%甲醛溶液5 mL加95 mL蒸馏水混合,实际上甲醛含量只有1.9%~2.0%。这样的配法已成为一般实验室常用的惯例。用福尔马林液固定精细的解剖标本时,要与甘油、酒精、石碳酸等混合使用。
注意:福尔马林液作为保存液会慢慢挥发而致使浓度降低,并且福尔马林液在保存中往往形成多聚甲醛,使浸液变浊,影响观察。所以,根据一定保存期的情况,可适当增加福尔马林液的浓度或更换新液,以防标本被腐蚀。
2.酒精(乙醇)
配方
酒精一般用于固定浸制标本材料,浓度通常是70%(体积分数,同类的后同)。市售的工业用酒精浓度是95%左右,使用时要重新配制。为了防止酒精使标本硬化,保存一些精细的材料或解剖标本时,可加入少量甘油,因为甘油具有润软组织的作用。
3.吉尔桑氏(Gilson’s)液
配方
吉尔桑氏液适用于肉质菌类,特别是柔软胶质状的材料如木耳等。配方是:50 mL 60%酒精+2 mL冰醋酸+7.5 mL 80%硝酸+氯化汞10 g+440 mL蒸馏水。使用吉尔桑氏液固定材料的时间为18~20 h,然后用50%酒精冲洗材料除去氯化汞(如用水冲洗会使材料膨胀)。固定后的材料可以使用其他保存液进行保存。
4.福尔马林-醋酸-酒精(FAA)液
配方
这种固定液适用于固定一般植物茎、叶组织,配方是:85 mL 50%酒精+10 mL福尔马林+5 mL冰醋酸。植物组织通常需要固定12 h,木质化程度高的组织需要约1周,也可用这种混合溶液长期保存植物组织。
5.包因氏(Bouin’s)液
配方
这种固定液适用于固定一般组织学、胚胎学的材料,如植物组织的根尖和胚囊等。配方是:75 mL苦味酸饱和水溶液+5 mL冰醋酸+25 mL福尔马林。这种固定液渗透迅速,固定均匀,组织收缩少,染色后能显示一般的微细结构,也可以用于长期保存材料。保存后的植物材料使用前需用20%酒精冲洗几次。
6.绍丁氏(Schaudinn’s)液(www.xing528.com)
配方
这种固定液适用于固定植物的精子和游动孢子等。配方是:甲液——66 mL氯化汞饱和水溶液+33 mL 95%酒精;乙液——冰醋酸1 mL。甲、乙液要在临用前混合。这种固定液材料如制作涂布装片,可在40℃下固定10~20 min。
7.纳瓦兴氏(Nawaschin’s)液
配方
高等植物有丝分裂材料适宜在这种固定液里固定或长期保存。配方是:甲液——1.5 g铬酸+10 mL冰醋酸+90 mL蒸馏水;乙液——40 mL福尔马林+60 mL蒸馏水。临用前将等体积甲、乙液混合。
8.鲁哥氏(Lugol's)液
配方
这种固定液适用于固定藻类植物材料。配方是:4 g碘+6 g碘化钾+100 mL蒸馏水。使用时,1 000 mL水样中加15 mL鲁哥氏液。
9.弱铬酸-醋酸液
配方
这种固定液适用于固定藻类植物材料。配方是:2.5 mL 10%铬酸水溶液+5 mL 10%冰醋酸水溶液+92.5 mL蒸馏水。
复习思考题?
2.洋葱鳞片叶的红色与红辣椒的红色其显色原理是否一样?
3.洋葱鳞片叶表皮临时装片上,是否每个细胞都能看到细胞核,为什么?
4.植物细胞有丝分裂可分为哪几个时期,各时期的主要特征是什么?
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