随着物理和化学方法的发展,植物激素可采用薄层层析法(Thin Layer Chromatography,TLC)、气相色谱(Gas Chromatography ,GC)、高效液相层析(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)和质谱法(mass spectrography,MS)等方法来测定,其原理大都是基于不同物质在不同介质中有不同的分配系数。如生长素测定用这些方法可达到10-12g的水平,相当于一个豌豆茎切段或一个玉米谷粒中的生长素含量。运用这些方法还可正确分析生长素的前体、生长素的周转(overturn)以及生长素在植物中的分布等。
色质联谱(GC-MS)可更为精确地检测多种激素,比如赤霉素的测定,先用气相色谱分离提取出混合物中的几十个组分,然后将纯赤霉素组分再进入质谱进行定性定量分析,由于质谱专一性很强,不致造成对非赤霉素物质的错误判断,因此测定结果准确可靠。
一般检测之初,需先用有机溶剂从植物样品中提取游离态激素。但因激素常以各种结合态存在,且结合态含量往往较高,在操作过程中必须防止结合态激素的水解。为了测定内源激素在提取与纯化过程中的损失量,常以放射性同位素3H 或14C,或以稳定性同位素2H 或13C标记的激素作为内在标准物。(www.xing528.com)
乙烯是一种气态激素,常用气相色谱仪测定,该法灵敏、准确,测定一个样品只要几分钟的时间。先将植物组织置于一个密闭容器中,然后用注射器抽取释放的乙烯气体,在气相色谱仪上分离测定。
高效液相色谱(HPLC)技术是检测、分离与纯化激素的有效手段。在HPLC 技术中,反相层析应用水溶液为流动相更有利于激素的分离与纯化。
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