土壤微生物测定：环境科学与工程实验

土壤是微生物生长、繁殖及进行生命活动的天然培养基，土壤中微生物存在的种类多、数量大。通过测定土壤中微生物的种类、数量，了解土壤肥力及有机物降解、转化情况。

（一）实验目的

（1）学习土壤微生物样本的采集方法。

（2）了解土壤中微生物主要种群及其数量存在状况。

（3）了解微生物在土壤中的作用。

（二）仪器和材料

（1）培养基 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（培养细菌）、淀粉琼脂培养基（培养放线菌）、查氏培养基（培养霉菌）。

（2）仪器 高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱、移液枪等。

（3）器皿 灭菌培养皿、灭菌三角瓶、灭菌试管、无菌水等。

（三）实验内容与操作方法

1.土壤采样

（1）采样前准备 采样前应准备好灭菌的小铲、土钻若干把，灭菌的纸袋、铝盒、记录本。(www.xing528.com)

（2）采样地点 根据实验要求选择采样地点，同时记录采样日期、时间；采样地的特点；土壤类型或土地利用方式；植被状况等。

（3）采样方法 在一定的土壤范围内，可采取蛇形或棋盘或五点法不同点取样，最少为5个点，每个点取约100g土样，放入纸袋中，并在采样袋上写明日期、时间、地点、采样人及采样深度等内容。

（4）样品保存 将采集的土样迅速带回实验室，准备测定。如不能及时测定，将土样放在4℃的条件下保藏，时间不要超过24～48h。

2.土壤微生物的测定

（1）配制土壤浸出液 将同一土壤范围的土样混合均匀，称取土样5g，加入装有45mL的无菌水的三角瓶中，再装入若干玻璃珠，充分振荡或在摇床上震荡10min，静置2min，制成10^-1的稀释液，如果土壤中有机物质含量高，视情况制成10^-2、10^-3、10^-4、10^-5等不同稀释梯度的稀释液。

（2）土壤微生物的测定 每种土样选择3个稀释度，每个稀释度设3次重复。用无菌吸管吸取1mL的土壤悬液于无菌培养皿中，再加入已熔化并冷却至约45℃的培养基，然后轻轻地摇动，混合均匀。凝固后，倒置于37℃的恒温培养箱中培养。

（3）菌落计数 进行平皿计数时，可用肉眼观察计数，也可用放大镜和菌落计数器，记下同一浓度的3个平板的菌落数，计算平均值，再乘以稀释倍数。

（4）计算 计算出每克土壤中微生物的个数。

（四）思考题

（1）制作土壤浸出液时，为什么要充分震荡？

（2）如果土壤采集的量偏少，可能会出现什么问题？