浮游微生物测定在空气中的应用

（一）实验目的

（1）通过实验了解不同环境条件下空气中微生物的分布状况。

（2）学习并掌握空气中微生物测定的基本方法。

（二）实验原理

空气不是微生物生存的良好环境，然而，在空气中仍存在着相当数量的微生物。但是，其最终还是要沉降到固体表面或地面上。通过这一特点，空气中的微生物沉降到固体培养基的表面，经过培养，形成肉眼可以看到的细胞群体，即菌落。观察菌落的大小、形态，可以大致鉴别空气中存在的微生物种类。利用计数菌落数，按公式推算单位体积内微生物的数量。

（三）仪器和材料

（1）培养基 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、高氏一号培养基、查氏琼脂培养基。

（2）仪器 高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱、空气采样器等。

（3）器皿 灭菌培养皿、三角瓶、无菌水等。

（四）实验内容与操作方法

1.沉降法

（1）标记培养皿 分别在皿底贴上标签，注明所用的培养基，同时进行编号。

（2）制作平板 将熔化的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基、马铃薯培养基，各倒入15个培养皿，冷凝。

（3）采样 在一定的面积内（室内或室外）按5点采样法，每种培养基、每个点放3个平板，打开培养皿盖，暴露5min或10min后，盖上培养皿盖。

（4）培养 将培养皿倒置，培养细菌的培养皿置37℃恒温培养箱培养24～48h，培养真菌和放线菌的培养皿置28℃恒温培养箱培养3～7d。

（5）观察 培养结束后，观察各种微生物的菌落大小、形态、颜色等特征，并记录。(www.xing528.com)

（6）计算 计数平板上的菌落数，根据奥梅梁斯基换算公式计算出1m³空气中的微生物数量。如果平板培养皿的面积为100cm²，在空气中暴露5min，于37℃下培养24h后长出的菌落数，相当于10L空气中的细菌数，即：

式中 X——每立方米空气中的菌落数，个/cm³空气

N——平板培养基在空气中暴露5min，于37℃恒温培养箱培养24h后长出的菌落数，个/cm²

r——皿底半径，cm

2.过滤法

（1）准备 盛有10L蒸馏水瓶，100mL无菌水的三角瓶。

（2）安装 安装好空气采样器，将采样器分别放在5个采样点上。

（3）采样 打开10L蒸馏水瓶，使水缓缓流出，外界空气经过喇叭口进入100mL无菌水的三角瓶中，10L蒸馏水流完后，10L空气中的微生物被滤在100mL无菌水的三角瓶中。

（4）培养 将5个三角瓶的液体摇匀，分别从中吸取1mL注入无菌培养皿中（平行3个皿），之后，加入已经熔化的冷却到45℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基，摇匀，凝固后，置37℃恒温培养箱培养。培养放线菌和真菌相同方法。

（5）计算结果 培养24h，依平板上长出的菌落数，计算出每升空气中细菌的数目。先按下列公式计算出每一套采样器的细菌数，再求出5套采样器的平均值。

式中 s——1mL水中培养所得菌数，个/L空气

（五）思考题

（1）试比较沉降法和过滤法测定空气中微生物数量的异同点。

（2）试分析沉降法测定空气中微生物数量的优缺点。

（3）在空气微生物的测定中，应从哪几个方面确定采样点？