紫外线杀菌实验：目的、原理与方法

（一）实验目的

了解紫外线的杀菌作用原理，学习紫外线杀菌实验方法。

（二）实验原理

紫外线对微生物有很强烈的致死作用，微生物对紫外线的吸收与剂量有关。剂量高低取决于紫外灯的功率、照射距离与照射时间。此外紫外线穿透力很弱，普通玻璃、薄纸、水层等均能阻止其透过，故紫外线只限于进行物体表面或接种室的空气灭菌。经紫外线照射后的受损细胞，遇光会有光复活现象，故处理后的接种物应避光培养。

（三）实验器材

（1）活材料 培养好的细菌。

（2）培养基 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。

（3）器材 无菌水、无菌培养皿、1mL无菌吸管、玻璃刮铲、灭菌五角星形图案纸、紫外灯箱。

（四）实验方法

（1）制平板 取无菌培养皿6套，将已熔化并冷却至50℃左右的牛肉膏蛋白胨琼脂培养基按无菌操作法倒入培养皿中，使之冷却成平板。(www.xing528.com)

（2）菌悬液制备 取试管无菌水2支，以无菌操作法取培养好的两种细菌各2环，接入无菌水中充分摇匀，制成菌悬液。

（3）接种 将培养皿分成两组，分别接种菌悬液各0.1mL，用无菌刮铲涂匀，随即用无菌镊子夹取无菌图案纸小心放在接种好的平皿中央。接种图如图1-15所示。

图1-15 接种图

（4）紫外线处理 将紫外线灯先预热2～3min，再将上述培养皿置于紫外灯下，打开皿盖，在30cm距离处照射。一组1min，一组5min，一组10min，小心地取下图案纸，盖上皿盖。用黑布或厚纸遮盖，送入培养箱。

（5）培养 将培养皿于28～30℃下培养48h。

（6）取出培养皿观察并分析平板上细菌生长的状况，绘图表示。

（五）实验作业

记录观察到的结果，填写表1-6。

表1-6 实验结果记录表