环境科学：纯培养菌种的形态特征观察

（一）实验目的

（1）基本掌握不同培养基的配制方法。

（2）通过观察比较细菌、放线菌、酵母菌及霉菌的菌落特征，初步达到鉴别上述四种菌落特征的能力。

（二）仪器和材料

（1）恒温培养箱、显微镜、酒精灯、载玻片、盖玻片、接种环等。

（2）细菌、放线菌、酵母菌及霉菌四种培养基配方（表1-1～表1-5）。

表1-1 牛肉膏蛋白胨琼脂培养基

注：用于培养细菌，具体配制方法：将上述各成分加入900mL蒸馏水中，煮沸至琼脂完全溶解，加热过程中不断搅拌，避免糊底。用蒸馏水补充至1000mL，调整pH为7.0～7.2。趁热用纱布或脱脂棉过滤，分装灭菌后，冷藏备用。

表1-2 淀粉琼脂培养基（高氏一号）

续表

注：用于培养放线菌，具体配制方法：配制时先用少量冷水将淀粉调成糊状，在火上加热，边搅拌边加水及其他药品，加热溶解后，补充水分至1000mL。

表1-3 蔗糖硝酸钠培养基（查氏培养基）

注：配制方法同牛肉膏蛋白胨琼脂培养基。适合于鉴定多数霉菌，如用于分离霉菌时，可加乳酸调制成pH为5.0～5.5的酸性培养基。

表1-4 马铃薯培养基

注：用以培养酵母菌，具体配制方法：新鲜马铃薯去皮，切成薄片，称200g，加蒸馏水1000mL，煮沸0.5h，用四层纱布过滤，补足因蒸发而减少的水分，即制成20%马铃薯汁，然后再加入计算量的葡萄糖（或蔗糖）和琼脂。加热熔化并用玻璃棒从加热容器底部不断搅拌，直至所有组分完全溶解。如果在上述培养基中加入1%的酵母粉或蛋白胨，则能促进孢子的大量增加。

表1-5 豆芽汁培养基(www.xing528.com)

注：适用于酵母菌和霉菌的培养，具体配制方法：先将洗净的豆芽放在水中煮沸30min，用两层纱布滤去豆芽，将豆芽汁补足水分，加糖（培养酵母菌时，糖量要高）。

（三）实验内容及方法

1.四种菌的培养

在无菌操作下，用接种环分别挑取平板上生长的各种菌，并把它们分别接种于各个培养基上，培养细菌的培养皿，置于37℃恒温培养箱中，培养24～48h，放线菌、酵母菌、霉菌在28℃下培养3～7d。

2.菌落形态特征的观察与比较

不同微生物的个体及其群体，在培养基上的菌落特征不尽相同，一般通过菌落的形状、大小、表面结构、边缘结构、颜色、气味、透明度、黏滞性、表面光滑与粗糙、质地软硬等综合情况进行判别。

将培养好的菌落逐个观察、比较，描述各种菌的菌落特征，并记录、绘制菌落形态图。四种菌的菌落形态特征如下：

（1）细菌 菌落多为光滑型，湿润或较湿润，质地软，菌落与培养基结合不紧，表面结构及边缘结构特征较多，透明或半透明，具有各种颜色，菌落正反面的颜色基本相同，但也有干燥、粗糙的，有的呈霉状但不起绒毛。

（2）酵母菌 菌落呈圆形，大小接近细菌，表面光滑，质地软，颜色多为白色和红色，稍透明，菌落和培养基结合不紧，菌落正反面的颜色基本相同。

（3）放线菌 菌落硬度大，干燥致密，且与基质结合牢固，不透明，不易被挑取，菌落表面呈粉状或褶皱呈龟裂状，颜色多样，菌落正反面颜色一般不同。

（4）霉菌 菌落干燥，绒状或棉絮状，大而疏松，不透明，能扩散生长，用接种环易挑取，菌落与培养基结合较牢固，颜色多样且鲜艳，菌落正反面颜色一般不同。（注意如果做分离实验少，得到的单菌落可能还不太纯，镜检时会出现多种形态。）

（四）思考题

1.实验中哪几个步骤为无菌操作？

2.通过实验，能根据菌落特征辨别不同的微生物吗？