测量体内原位细胞存活比较困难,借助体外细胞培养技术,可使具有无限增殖能力的单个细胞繁殖成集落(克隆)。在培养基上接种一定数目的细胞经一定剂量照射后,可以通过计数形成的集落数来计量存活下来的细胞。为了集落计数标准一致,通常把含50个以上细胞的克隆计为一个集落,代表一个存活单位。但这不是一成不变的,在某些情况下,几个细胞也可作为一个集落。把在一定剂量下,生成的集落数目与原接种细胞数之比,称为该剂量下的存活分数(SF)。做细胞培养时,即使未受照射的细胞,也不能全部形成集落,这时形成的集落数与接种细胞数之比称为接种效率(Ep,%)或集落形成率。
SF计算与Ep校正式:
细胞增殖死亡的剂量曲线,如以算术坐标表示,呈S形(图6-1a),若以半对数坐标表示其存活分数,则可得到图6-1b所示的带肩区的直线,D0表示直线部分的斜率,它的含义是使细胞存活分数下降了63%所需的剂量。从存活分数为纵坐标的0.1和0.037两个点分别作平行线与曲线直线部分相交,然后分别作垂直线与剂量轴相交,剂量轴上两个相交点剂量之差为D0。图中的D0值为1Gy,大多数哺乳动物细胞的D0值为1~2Gy。D0是细胞辐射敏感性大小的主要参数,可以用它来比较不同细胞株的辐射敏感性。有时也用D37来反映辐射敏感性,D37是细胞存活分数从1.00降至0.37的剂量。
D37=D0+Dq
将曲线(图6-1b)的直线部分外推,使之与存活分数轴相交,相交点表示外推数N,N称为靶数或击中数,图6-1b中N等于3,对于大多数哺乳动物细胞,N=1~5,少数细胞N值可到10~20。如果从存活分数1.0处作为一平行线与上述外推线相交,相交点在剂量轴上的投影点即为准阈剂量(Dq)。Dq代表曲线的肩宽,反应克服曲线肩部所需的剂量,对于急性照射的有氧细胞,Dq为0.5~2.5Gy。N和Dq都是描述细胞亚致死损伤的承受能力,它们是反映细胞对这类损伤修复能力的指标。各参数之间的关系见图6-1。单靶单击模型条件下,剂量存活曲线是一条指数型直线,没有肩区,这时D37等于D0。(www.xing528.com)
DQ=D01nN
需要指出的是,细胞存活曲线可分为两类,一类是现象性的,另一类是机制性的。目前的模型多属现象性的,但对机制有时也有所阐明。建立机制性模型固然难度较大,但一旦成功,将具有更大的理论和实际意义。计算机的发展和应用为数学模型的拟合提供了有力的工具,将有助于机制性模型的建立。
图6-1 电离辐射引起细胞增殖死亡存活曲线及参数
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