ALT测定（赖氏法）：实验结果及正常参考值

【目的】 了解赖氏法测定转氨酶活性的原理、操作方法及临床意义，加深对转氨基作用的理解。

【原理】 丙氨酸与α-酮戊二酸在丙氨酸氨基转移酶（ALT）的作用下生成丙酮酸和谷氨酸，在酶反应到达规定时间时，加入2，4-二硝基苯肼-盐酸溶液以终止反应。生成的丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用，生成丙酮酸2，4-二硝基苯腙，后者在碱性溶液中显棕红色。根据颜色的深浅，可求得血清中ALT的活力。反应式如下：

【器材】 试管及试管架、刻度吸管、恒温水浴箱、分光光度计等。

【试剂】

1.0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4）　称取磷酸氢二钠（Na2HPO4，AR）11.928 g，磷酸二氢钾（KH2PO4，AR）2.176 g，加蒸馏水少量蒸馏水溶解并稀释至1 000ml。

2.ALT底物液　称取α-酮戊二酸29.2mg，DL-丙氨酸1.79 g于烧瓶中，加0.1mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液80ml，煮沸溶解后待冷，用1mol/LNaOH调节pH至7.4（约加入0.5ml），再用0.1mol/L磷酸盐缓冲液在容量瓶内加至100m l，混匀，加氯仿数滴，置冰箱可保存数周。

3.丙酮酸标准液（2μmol/ml）　精确称取丙酮酸钠（AR）22.0mg于100ml容量瓶中，加0.1mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液至刻度。

4.2，4-二硝基苯肼溶液　称取2，4-二硝基苯肼19.8mg，用10mol/L盐酸10ml溶解后，加蒸馏水至100ml，置棕色瓶内，冰箱保存。

5.0.4mol/LNaOH溶液　称取16 gNaOH溶于适量蒸馏水中，然后稀释至1 000ml。

【操作】 取2支试管按下表操作：(www.xing528.com)

混匀，静置10min，用505 nm波长比色，以蒸馏水调零，读取各管吸光度，用测定管吸光度值减去对照管吸光度值，查标准曲线得ALT活力单位。

【标准曲线绘制】 血清ALT测定（赖氏法）标准曲线绘制操作步骤如下表所示：

混匀，静置10min，用505 nm波长比色，以蒸馏水调零，读取各管吸光度，将各管吸光度值减去0号管吸光度值，以吸光度为纵坐标，各管相应的酶活性单位为横坐标，绘制成标准曲线。

【参考范围】 5～25卡门氏单位。

【临床意义】 ALT主要存在于各组织细胞，以肝细胞中含量最多，正常情况下只有极少量释放入血，血清中ALT活性很低。当肝细胞病变、坏死或肝细胞膜通透性增加时，ALT可大量释放入血，使血中该酶的活性显著升高，故此酶是判断肝细胞损伤的一个常用生化指标。

急性肝炎、药物中毒性肝炎时，血清ALT活性明显升高；肝癌、肝硬化、慢性肝炎、心肌梗死时，血清ALT活性中度升高；阻塞性黄疸、胆管炎时，血清ALT活性轻度升高。

【思考题】

1.何谓转氨基作用？

2.血清ALT活性升高有何临床意义？