【目的】 了解组织匀浆的制备方法,通过实验证明肝中酮体生成作用。
【原理】 以丁酸为底物,将丁酸溶液分别与肝匀浆和肌匀浆保温。肝细胞中含有酮体生成酶系,故能生成酮体,酮体中的乙酰乙酸及丙酮可与含硝普钠(亚硝基铁氰化钠)的显色粉反应产生紫红色化合物。肌肉中没有生成酮体的酶系,同样处理的肌匀浆则不产生酮体,因此不能与显色粉产生颜色反应。
【器材】 匀浆机、研钵、恒温水浴箱、离心机、剪刀、白瓷反应板、试管、滴管及试管架等。
【试剂】
(1)0.9%氯化钠溶液。
(2)洛克溶液:取氯化钠0.9g、氯化钾0.042g、氯化钙0.024g、碳酸氢钠0.02g、葡萄糖0.1 g放入烧杯中,加蒸馏水溶解后,加水至100ml,置冰箱中备用。
(3)0.5mol/L丁酸溶液:取44.0 g丁酸溶于0.1mol/LNaOH溶液中,加0.1mol/LNaOH溶液至1 000ml。
(4)0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH 7.6):准确称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·2H2O)7.74 g和磷酸二氢钠(NaH2PO4·H2O)0.897 g,用蒸馏水稀释至500ml,准确测定pH值。
(5)15%三氯醋酸溶液。
(6)显色粉:硝普钠1 g,无水碳酸钠30 g,硫酸铵50 g,混合后研碎。(www.xing528.com)
【操作】
(1)肝匀浆和肌匀浆的制备:取小鼠1只,断头处死,迅速剖腹,取出肝和肌组织,剪碎,分别放入匀浆器或研钵中,加入生理盐水(重量:体积为1∶3),研磨成匀浆。
(2)取4支试管,编号后按下表操作:
(3)将上列4支试管摇匀后放37℃恒温水浴中保温30min。
(4)取出各管,每管加入15%三氯醋酸20滴,摇匀,离心5min(3 000 r/min)。
(5)分别于各管取离心液滴于有凹白瓷反应板中,每凹放入显色粉一小匙(约0.1 g),观察并记录每凹所产生的颜色反应。
【结果观察】 观察各管颜色变化,并说明原因。
【思考题】 何谓酮体?酮体何处生成?何处利用?酮体生成利用有何意义?
免责声明:以上内容源自网络,版权归原作者所有,如有侵犯您的原创版权请告知,我们将尽快删除相关内容。