蛋白质的两性电离与等电点测定实验成果 正常人体功能

【目的】

（1）验证蛋白质两性电离与等电点性质。

（2）掌握酪蛋白等电点测定的原理和方法。

【原理】 蛋白质是两性物质，具有酸碱两种形式的电离特征。它在溶液中的带电情况既取决于自身的分子组成，也取决于溶液的pH值。调整溶液的pH值可以使蛋白质分子带不同的电荷。蛋白质在等电点时为兼性离子，其溶解度最低，容易沉淀析出；若在大于或小于等电点的pH值溶液中，因蛋白质分子带同种电荷而相互排斥，不易发生沉淀。一般情况下，偏离等电点越远，蛋白质所带的同种电荷越多，发生沉淀的可能性越小。因此，根据蛋白质分子在溶液中的沉淀物多少可测定蛋白质的等电点，反应如下：

【器材】 刻度吸管（0.5ml、1.0ml、5.0ml）、试管、吸耳球、试管架、记号笔等。

【试剂】

（1）5.0g/L酪蛋白醋酸钠溶液：称取纯酪蛋白0.5g，加蒸馏水40.0ml及1.0mol/LNaOH溶液10.0ml，振摇使酪蛋白完全溶解，然后加入1.0mol/L醋酸钠溶液10.0ml，混匀后移入100ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度并混匀。

（2）0.1 g/L溴甲酚紫指示剂：该指示剂变色范围pH3.8～5.4。酸式色为黄色，碱式色为蓝色。

（3）0.02mol/L HCl溶液。

（4）0.02mol/L NaOH液。

（5）1.0mol/L醋酸溶液。

（6）0.1mol/L醋酸溶液。

（7）0.01mol/L醋酸溶液。(www.xing528.com)

【操作】

1.蛋白质的两性电离

（1）取中号试管一支，加入5 g/L酪蛋白醋酸钠溶液0.3ml，0.lg/L溴甲酚绿指示剂1滴，混匀。观察溶液呈现的颜色。

（2）用乳头滴管缓慢滴加0.02mol/L盐酸溶液，随滴随摇，直到有明显的大量沉淀发生。观察溶液颜色的变化。

（3）继续滴入0.02mol/L盐酸溶液，观察沉淀与溶液颜色的变化情况。

（4）再滴入0.02mol/L氢氧化钠溶液，随滴随摇，可再度出现明显的大量沉淀，再继续滴加0.02mol/L氢氧化钠溶液，观察沉淀与溶液颜色变化情况。

2.酪蛋白等电点的测定

（1）取干净试管5支，按下表的顺序准确地加入个种试剂并混匀。

（2）静置20min，观察各管沉淀，并用“-”、“+、++、+++、++++”记录沉淀结果。

【思考题】

1.根据你所观察到的蛋白质两性电离实验的颜色及沉淀变化现象，说明其结果并解释其原因。

2.酪蛋白的等电点是多少？