高等有机化学实验：硅胶柱色谱与用量

控制好样品和硅胶的使用量是柱色谱最基本的要求。仅仅以实验室级别的硅胶柱色谱为例，小到直径不到1cm，长3～4cm，甚至某些情况下可以把普通的滴管改装为微量的柱色谱；大的硅胶柱色谱直径可以到40cm以上，长可达100cm以上，工业级别的柱色谱可以更大。不同大小、长短的色谱柱的特性也不一样。

（1）越小的柱色谱操作耗时越短，色谱过程几分钟就可完成，耗费的洗脱剂也很少；越大的柱色谱耗时越长，可能长达几十天，耗费的洗脱剂量很大，成本也更高。

（2）吸附色谱的固定相可能对样品中某些成分有较强的吸附能力，这些样品一旦吸附到硅胶柱色谱中就会造成死吸附，很难用洗脱剂洗脱。柱色谱操作的时间越短、硅胶的用量越少，这种死吸附就轻微，样品就浪费得越少；反之，如果柱色谱操作的时间越长、硅胶的用量越多，这种死吸附就严重，样品就浪费越多。

（3）硅胶有不同的规格，如100～200目，200～300目，H硅胶等等。硅胶目数越大，硅胶颗粒越小，对样品的吸附能力越强，同等情况下分离效果越好，但是耗时越长，样品死吸附越严重。硅胶目数越小，硅胶颗粒越大，对样品的吸附能力越弱，同等情况下分离效果越差，但是耗时越短，样品死吸附越轻微。(www.xing528.com)

（4）在柱色谱内径不变的情况下，柱色谱的长度越长，柱体积越大，分离效果越好，但是耗时越长，死吸附越严重；柱色谱的长度越短，柱体积越小，分离效果越差，耗时越少，死吸附越轻微。

（5）尽可能用较多的硅胶量来制作硅胶柱色谱，以防止样品过多导致硅胶超载，从而降低分离效果甚至没有分离效果。但硅胶用量也不可过多，否则会造成较严重的死吸附而损失样品。

（6）洗脱剂的选择也和柱色谱的长度和硅胶用量有关。假如洗脱剂用的是石油醚－乙酸乙酯、石油醚－丙酮等洗脱剂，则柱色谱中的硅胶用量不可过大，长度不能过长，否则洗脱剂可能无法完成洗脱；如果用的是氯仿－甲醇、氯仿－丙酮等洗脱剂，则可以适当加大硅胶用量，加长柱色谱的长度以得到更好的分离效果。所以，必须根据样品的量、样品的分离条件和要求选择合适的色谱柱。