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功能蛋白质相互作用定量分析模块设计与研制

时间:2023-10-18 理论教育 版权反馈
【摘要】:在蛋白质水平上,通过三重四极杆质谱仪和高分辨混合型质谱仪的结合,可望对大的肽片段乃至整体蛋白质进行多点定量分析,进一步结合离子表面共振与质谱检测,完成蛋白质相互作用的定量分析。图7-20功能蛋白质及其相互作用的定量分析模块流程图MRM:多反应监测扫描。该套体系对于不能进行细胞标记的组织和血液样本的定量分析非常有效。

功能蛋白质相互作用定量分析模块设计与研制

7.5.1 模块设计的方案(图7-20)

在肽段水平上,采用液相色谱联用三重四极杆质谱仪的多反应监测功能,实现目标肽段、目标修饰类型的相对定量和绝对定量,以监测不同时程的蛋白质变化情况。此外,目前蛋白质定量的体外标记系统,趋向于采用二级质谱的小分子标签,这类标签的检测通常在液相电喷雾/串联四极杆飞行时间质谱仪中效率最高。在蛋白质水平上,通过三重四极杆质谱仪和高分辨混合型质谱仪的结合,可望对大的肽片段乃至整体蛋白质进行多点定量分析,进一步结合离子表面共振与质谱检测,完成蛋白质相互作用的定量分析。该模块可以合成标准肽、非放射性同位素标准肽以及蛋白质复杂混合物,进行灵敏度和检测限的评价。

图7-20 功能蛋白质及其相互作用的定量分析模块流程图

MRM:多反应监测扫描(multiple reaction monitoring)。

7.5.2 设备设计方案和主要设计指标

基于该类仪器开发的MRM扫描模式,是标准肽段的绝对定量金标准,但分析通量比较有限,因此配备了2台相关质谱仪,主要用于小分子标签内标的绝对定量。该套体系对于不能进行细胞标记的组织和血液样本的定量分析非常有效。

7.5.2.1 液相色谱三重四极杆质谱仪(Agilent 6490)

Agilent 6490质谱仪性能参数见表7-10,原理图见图7-21。

表7-10 Agilent 6490质谱仪的性能参数

*见329页脚注

图7-21 三重四极杆原理图(www.xing528.com)

Quad mass filter:四极杆质量过滤器;Quad collision chamber:四极杆碰撞池;Particle multiplier:离子倍增器;Component ion selection:离子筛选;Ion Fragmentation:离子碎裂;Fragment ion selection:碎片离子筛选。

7.5.2.2 液相电喷雾高分辨Q-trap混合型质谱仪(SCIEX 6500)

SCIEX 6500质谱仪技术指标见表7-11,构造图见图7-22。

表7-11 SCIEX 6500技术指标

**cps:counts per second(每秒计数)。

(续表)

*amu:atomic mass unit(原子质量单位),规范的单位符号为u。

图7-22 SCIEX 6500质谱仪构造图(彩图见图版第26页)

图片引自Lim,Tai,Lee,et al,2012,DOI:10.1007/s00216-011-5558-2。

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