氨基酸含量测定依据Martino等(2003)的修改方法，用反相高效液相色谱(HPLC)、柱前衍生的方法进行测定。色谱仪为美国Agilent高效液相色谱仪、G1321A荧光检测器、C18分析色谱柱。
3.1.6.1 试剂
氨基酸标样(色谱纯，Sigma)，邻苯二甲醛(OPA，色谱纯，Sigma)，β-巯基乙醇，甲醇和乙氰(色谱纯，上海国药)、三乙胺、四氢呋喃、硼酸钠、醋酸钠、盐酸、氢氧化钠、水为超纯水(Milli-Q)。
3.1.6.2 衍生剂的配制
称取OPA 25mg，加入0.5mL甲醇，再加入β-巯基乙醇100μL，用硼酸缓冲液(pH10.4)定容至5mL。
3.1.6.3 流动相配制
流动相A:称取0.82g醋酸钠，分别加入90μL三乙胺、1.5mL四氢呋喃，用1%的醋酸调节pH到7.2，最后用超纯水定容至500mL，混匀后经0.45μm微膜过滤后使用。
流动相B:称取0.82g醋酸钠，分别加入200mL甲醇和乙氰后，用1%的醋酸调节pH到7.2，最后用超纯水定容至500mL，混匀后经0.45μm微膜过滤后使用。
3.1.6.4 样品的提取(www.xing528.com)
取0.5g新鲜材料，加入1.5mL 10mmol/L甲酸研磨后，以12000rpm 4℃离心10min，取上清液，经0.45μm微膜过滤后使用。
3.1.6.5 样品的柱前衍生
取提取的氨基酸样品1mL，加入新配好的OPA衍生试剂3mL，充分混匀反应1min后，立即用HPLC进行分析。
3.1.6.6 样品的HPLC分析
样品氨基酸分离采用流动相梯度洗脱，流动相梯度洗脱程序见表3-1。柱温40℃，荧光检测器激发波长350nm，发射波长450nm，采用外标法对氨基酸含量进行计算。
表3-1 HPLC分析氨基酸流动相梯度
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