银柴胡DNA提取方法筛选|竞新集

李 军 郝彩琴 张 燃 冷晓红

摘要：本研究拟筛选最适合银柴胡叶片、鲜根和干根总DNA 提取的方法，为同科、同属及同类药材总DNA 提取提供依据，并为银柴胡DNA条形码分子鉴定及分子生物学研究奠定基础。本研究采用2%CTAB 法、4%CTAB法、SDS 法、试剂盒法、高盐低pH 值法和尿素法共6 种方法提取银柴胡叶片、鲜根和干根总DNA，用琼脂糖凝胶电泳法、紫外分光光度计法及PCR 扩增法检测所提取DNA 的质量。试剂盒法提取银柴胡叶片、鲜根和高盐低pH 值法提取干根总DNA 的D260 nm/D280 nm 值分别为1.875、1.848、1.878，电泳条带清晰，无拖尾。利用上述方法提取的DNA 可以扩增出ITS2 和psbA-trnH 序列。用试剂盒法提取银柴胡叶片、鲜根和用高盐低pH 值法提取银柴胡干根DNA 简便、快速，用这些方法得到的DNA 适合用于分子生物学的进一步研究。关键词：银柴胡；DNA 提取；分子鉴定；筛选

作者简介：李军（1982—），副教授，硕士，国家执业药师，自治区级教学名师，生物制药技术专业带头人, 研究方向为中药资源与开发。(www.xing528.com)

*本文为宁夏回族自治区教育厅项目（NGY2016259）成果，发表于《药学学报》2019 年第5期。

银柴胡（别称银胡、山菜根、牛肚根、沙参儿、白根子等）是石竹科繁缕属植物银柴胡（Stellaria dichotoma L.var.lanceolate Bge.）的干燥根［1］，味甘性寒，具有清虚热、除疳热的功效，临床用于阴虚发热、骨蒸劳热、小儿疳热等症［2］。银柴胡作为2015 年版《中华人民共和国药典》收载的传统中药［3］，在临床上的应用比较广泛，传统中成药乌鸡白凤丸即以银柴胡为主要成分［4］。DNA 条形码技术（DNA bar-coding）作为中药材物种鉴定研究的新方法，是利用标准的、有足够变异的、易扩增且相对较短的DNA 片段对物种进行快速、准确的鉴定的技术［5］，具有鉴定结果准确、可重复性良好、方法通用性强等优点。DNA 条形码技术已经在冬虫夏草、枸杞、羌活、党参、天南星、锁阳等中药材及其混伪品的鉴定中取得了良好的效果［6］，并已被收录进2015 年版《中华人民共和国药典》［3］。获取高质量的DNA 是进行银柴胡DNA 条形码研究的必要前提和关键环节。本研究以银柴胡叶片、鲜根和干根为材料，考察6 种DNA 提取方法，旨在寻找一种能够得到相对高产量、高纯度的适用于银柴胡总DNA 提取的方法［7-8］，为后续银柴胡DNA 条形码分子鉴定及分子生物学的深入研究提供技术依据。