化学灭菌法：湿热、干热和高压蒸汽灭菌的效果和使用范围比较

灭菌是用物理、化学因素杀死全部微生物的营养细胞和它们的芽孢。消毒指只杀死一部分微生物，主要是病原微生物。一般消毒剂常用的浓度只能杀死普通的微生物，而不能杀死其芽孢和孢子。所有培养基和微生物工作中的用具在使用前必须经过严格的灭菌，以避免原来生活在这些器材上的微生物干扰工作。

灭菌方法主要有化学灭菌法和物理灭菌法。

化学灭菌法是利用化学药剂使细菌细胞蛋白质凝固变性而杀灭细菌的方法。

物理灭菌法是利用高温、紫外线和超声波等灭菌的方法。

高温灭菌法是微生物实验中常用的灭菌法，其中包括烧灼、干热烘烤和高压蒸汽灭菌等。

湿热穿透力比干热的穿透力大，湿热时微生物吸收了高温水分，较易使菌体蛋白质凝固，湿度越大，杀菌力越强，而在干燥的环境中微生物抵抗高温的能力较强，芽则更强。因此在同一温度下，湿热灭菌法比干热灭菌法的效力大。一般湿热灭菌在115～120℃左右只需15～30min，而干热灭菌则需要在160℃灭菌2h才能达到与湿热相同的效果。

表8.2　高压灭菌器中温度与压力的关系(www.xing528.com)

高压蒸汽灭菌法是湿热灭菌法的一“种”，灭菌效率特高。在常压下将水加热煮沸，只能得到100℃的蒸汽，不能一次把所有的微生物及其芽孢杀死，要反复多次才能达到灭菌的目的，这叫做间歇灭菌。而高压蒸汽灭菌则不同。它是利用密闭的容器蒸煮，所以蒸汽的压力可以高于大气压，蒸汽温度也随着升高，当容器内的蒸汽压达到一个大气压时，水的沸点提高到121℃，在这个温度下只需要很短的时间就可杀死一切微生物的细胞及其芽孢或孢子。表8.2所列是高压灭菌器中温度与压力的关系。

普通培养基、耐热药品、玻璃器皿等都可用高压灭菌器灭菌。一般采用一个大气压121℃持续15～20min。对于容易被高温破坏的物质，如含葡萄糖、乳糖的培养基，则应降低温度至115℃（必要时可适当地延长灭菌时间）。有些则只能用过滤法除菌（如维生素等）。

干热烘烤是在烘箱内利用热空气进行灭菌的方法。一般在160℃温度下烘烤2h。温度不应超过170℃（以避免包装器皿的纸被烧焦。此法适用于金属或玻璃器皿的灭菌）。

烧灼是利用火焰直接把微生物烧死，同烘烤一样，也是一种干热的灭菌法。此法灭菌很彻底、迅速，但使用范围有限。适用于接种针、接种环、载破片、试管口等及不能再用的污染物品的灭菌。

微生物的分离、接种等实验最好在经紫外线灭菌的无菌室或无菌箱内进行，要严格注意无菌操作。在没有无菌室或无菌箱的情况下，实验精确度又要求不高时，则可在一般的实验室内进行，但要特别注意无菌操作。在后面实验四中将举例说明制备染色标本涂片的无菌操作过程。