病毒培养的方法-水处理微生物学

将噬菌体的敏感细菌接种在液体培养基中，经培养后敏感细菌均匀分布在培养基中而使培养基浑浊。然后接种噬菌体，敏感细菌被噬菌体感染后发生菌体裂解，原来浑浊的细菌悬液变成透明的裂解溶液（见图4.37）。

将噬菌体的敏感细菌接种在琼脂固体培养基上生长形成许多个菌落，当接种稀释适度的噬菌体悬液后引起点性感染，在感染点上进行反复的感染过程，宿主细菌菌落就一个个地被裂解成一个个空斑，这些空斑就叫噬菌斑。

病毒是专性寄生在活的敏感宿主细胞内才能生长繁殖的微生物。因此，病毒的培养基要求苛刻，专一性强。其敏感细胞要具备如下条件：①必须是活的敏感动物或是活的敏感动物组织细胞；②能提供病毒附着的受体；③敏感细胞内没有破坏特异性病毒的限制性核酸内切酶，病毒进入细胞就可生长繁殖。

图4.37　噬菌体在液体培养基的培养特征

（a）被噬菌体感染之前培养液浑浊；（b）被噬菌体感染之后培养液清

不同种类的病毒其培养基是不同的。

脊椎动物病毒的培养基有：人胚组织细胞（如人胚肾、肌肉、皮肤、肝、肺、肠等器官的细胞）；人组织细胞（如扁桃体、胎盘、羊膜、绒毛膜等）；人肿瘤细胞（如Hela细胞、Hep-2细胞、上皮癌细胞等）；动物组织细胞（如猴肾和心脏、兔肾、猪肾细胞等）；鸡、鸭胚细胞（如肌皮和全胚细胞）；敏感动物（如猴、兔、羊、马、小白鼠、豚鼠等）。脑炎病毒最宜选用幼龄小白鼠作敏感动物。(www.xing528.com)

植物病毒的培养基：与之相应的敏感植株和敏感的植物组织。

噬菌体的培养基：与噬菌体相应的敏感细菌，如大肠杆菌噬菌体用大肠杆菌培养。

1.动物病毒的培养

动物病毒的培养方法有动物接种、鸡胚接种和组织培养技术。现在动物接种很少用，仅柯萨奇A病毒组（肠病毒）的分离仍用此法。鸡胚接种常用于分离流感病毒，鸡胚的羊膜腔和尿囊腔用作常规注射部位，如痘病毒被注射入绒毛尿囊膜上，以呈现在尿囊膜表面的痘斑或痘疱进行计数。

2.噬菌体的分离培养

用双层琼脂法培养，在实验的前一天在灭菌的培养皿内倒入10mL适合某种宿主菌生长的琼脂培养基，待凝固成平板后置于一定温度的恒温箱内烘干平板上的水分，取2～3滴宿主菌（每mL含108个细菌）于软琼脂培养基（融化并冷至45℃）中，再加入0.1mL噬菌体样品，摇动混匀后全部倒入，使铺满整个琼脂平板上，凝固后，于一定温度的恒温箱中倒置培养一定时间后，取出计数。