普通光学显微镜的使用与保护

1.基本结构

普通光学显微镜由光学放大系统和机械装置两部分组成。这两部分很好地配合，才能发挥显微镜的作用。光学放大系统一般包括目镜、物镜、聚光器、光源等；机械装置一般包括镜筒、物镜转换器、聚焦器、镜台、镜臂和底座等。

标本的放大主要由物镜完成，物镜放大倍数越大，它的焦距越短，物镜的透镜和玻片间距离（工作距离）也越小。放大倍数为90～100×的物镜为油镜，油镜的工作距离很短，使用时须格外注意。目镜只起放大作用，不能提高分辨率，标准目镜的放大倍数是10倍。聚光器能使光线照射标本后进入物镜，形成一个大角度的锥形光柱，因而对提高物镜分辨率是很重要的。聚光器可以上下移动，以调节光的明暗。可变光圈可以调节入射光束的大小。

2.工作原理

显微镜的放大效能（分辨率）是由所用光波波长长短和物镜的数值口径决定的，缩短使用的光波波长或增加数值口径可以提高分辨率。可见光的光波波长幅度比较窄，而紫外光波长短，可以提高分辨率，但不能用肉眼直接观察。利用减小光波波长来提高光学显微镜分辨率是有限的，提高分辨率的理想措施是提高物镜的数值口径，可以采用提高介质折射率的方法。例如，可用香柏油做介质。因空气的折射率为1，而香柏油的折射率为1.51，和载片玻璃的折射率（1.52）相近，这样光线可以不发生折射而直接通过载片、香柏油进入物镜，从而提高分辨率。显微镜总的放大倍数是目镜和物镜放大倍数的乘积，物镜的放大倍数越高，分辨率越高。

3.操作步骤

（1）将显微镜自显微镜柜子或木盒内取出时，要用右手握紧执手，轻轻拿出。由于镜体较重，必须用左手托住镜座，才能做较远距离的搬动。

（2）将显微镜置于实验台上时，应放在身体的左前方，离桌子边缘约30mm处。右侧可放记录本或绘图纸等。

（3）使用显微镜前，首先要调节好光源。在实验室中可利用灯光或自然光，但不能用直射的阳光，以免损伤眼睛。为了迅速而正确地对光，应先用10×物镜，把光圈放到最大位置，在用眼睛观察目镜中视野的同时，转动反光镜，使视野的光线最明亮、最均匀。如果距离光源较近，可用平面的反光镜；如果距离光源较远，可用凹面的反光镜。有的显微镜不具有聚光器，则应用凹面的反光镜。

（4）把制片放在显微镜的镜台上，将要观察的部位准确地移到物镜的下面，然后用压片夹压紧。

（5）观察时要睁开双眼，用左眼观察显微镜目镜视野中的像。(www.xing528.com)

（6）进行观察时，应先用10×物镜。为了避免物镜压坏制片（在使用高倍物镜时最易发生），必须用下面的方法聚焦：一方面从侧面注视物镜与制片间的距离，一方面转动粗聚焦器，使镜筒逐渐下降，直到接近盖玻片为止。然后用左眼观察目镜视野，慢慢转动粗聚焦器使镜筒逐渐上升，直到看清制片中的影像为止。

观察制片时，首先在低倍物镜下了解制片上切片的概况，如果要观察部分位于视野的一侧，则应移动制片，使要观察的部位位于中央。注意：显微镜中所形成的像是倒像，因此要改变图像在视野中的位置，须向相反的方向移动制片。

有的显微镜带有4×物镜，使用时其焦距与10×和40×物镜不同，因此当由4×物镜转换为10×物镜观察制片时，需要重新聚焦。

（7）细聚焦器是显微镜上最易损坏的部件之一，要尽量保护，以免损坏。一般用低倍物镜观察时，用粗聚焦器就可以调好焦距，此时可以不用或尽量少用细聚焦器。如使用高倍物镜需要用细聚焦器聚焦时，其旋钮转动量最好不要大于半圈。

（8）当详细观察制片中某一部分的细微结构时，可先在低倍物镜下找到最合适的地方，并移至视野中央，然后转动镜头转换器用高倍物镜（10×或40×）观察。当换到高倍物镜后，应该看到制片中的影像。如果影像不清楚，可顺时针或逆时针方向转动细聚焦器，直到影像清晰为止。如果转换高倍物镜后看不到影像，则可能所观察的对象没有在视野中央的位置，需要转换到低倍物镜，重新调整制片位置。当看到影像以后，还要用光圈调节光束的粗细。这一点很重要，如果光束过于粗大，光线过强，将使一些较为透明的结构不易看清；如果光束过细，光量不足，将使影像灰暗不清。因此必须调节光圈，以达到最好的观察效果。在调节光圈时，不要触动反光镜，以免改变光线的折射方向。

4.操作显微镜的注意事项

（1）任何旋钮转动有困难时，都绝不能用大力去转动它，而应查明原因，排除障碍。自己不能解决时，要向指导教师说明，请指导教师帮助解决。

（2）要保持显微镜的清洁，尽量避免灰尘落到镜头上，否则容易磨损镜头。必须尽量避免试剂或溶液玷污或滴到显微镜上，导致损坏显微镜。高倍物镜很容易被染料或试剂玷污，如被玷污，应立即用擦镜纸擦拭干净。显微镜用过后，应用清洁棉布轻轻擦拭（不包括物镜和目镜镜头）。

（3）要保护物镜、目镜和聚光器中的透镜不被损伤。光学玻璃比一般玻璃的硬度小，容易损伤。擦拭光学透镜时，只能用专用的擦镜纸，不能用棉花、棉布或其他物品。擦拭时要先将擦镜纸折叠为几折（不少于4折），从一个方向轻轻擦拭镜头，每擦一次，擦镜纸就要折叠一次，绕着物镜或目镜的轴旋转，轻轻擦拭。如未按上述方式擦拭，落在镜头上的灰尘很易损伤透镜，出现一条条的划痕。

（4）每次实验结束时，应将物镜转成八字形垂于镜筒下，以免物镜镜头下落与聚光器相碰撞，也可用清洁的白纱布，垫在镜台与物镜之间。