目的基因导入受体细胞:高中生物核心知识一本通

1.植物

（1）花粉管通道法（我国科学家独创）：

①子房注入法：用微量注射器将含有目的基因的DNA溶液直接注入子房中。

②柱头滴加法：在植物受粉后的一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借助花粉管通道进入胚囊。

（2）农杆菌转化法（最常用的方法）：

①转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。

②原理：农杆菌中含有Ti质粒（tumor inducing plasmid），当它侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的T-DNA（transfer DNA，可转移的DNA）转移到被侵染的细胞，并且将其整合到受体细胞的染色体DNA上，使目的基因能维持稳定和表达。

③处理方法（受体植物的不同）：

a.将新鲜的从叶片上取下的圆形小片与农杆菌共培养，然后筛选转化细胞，并再生成植株。

b.将花序直接浸没在含有农杆菌的溶液中一段时间，然后培养植株并获得种子，再进行筛选、鉴定等。(www.xing528.com)

提醒:农杆菌能在自然条件下侵染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有侵染能力。选择受伤的叶片进行共培养理由是：叶片伤口处的细胞释放出大量酚类物质，可吸引农杆菌移向这些细胞。

2.动物：显微注射法。

3.微生物：Ca2+处理法（感受态细胞法）。

（1）受体细胞：原核细胞（使用最广泛的是大肠杆菌）。

（2）方法：先用Ca2+处理大肠杆菌细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态（这种状态的细胞被称为感受态细胞，可以提高受体细胞的转化率），然后再将重组的基因表达载体导入受体细胞。

温馨提示

①受体细胞的选择：植物可以选受精卵或体细胞；动物一般是受精卵；微生物中，常选的原核生物是大肠杆菌，它们具有繁殖快、容易培养，遗传物质相对较少等优点。

②外源目的基因导入受体，稳定遗传而不符合孟德尔遗传规律的原因是：外源基因插入基因组中可能为单位点插入，或者同一染色体多位点插入，或者不同染色体多位点插入。大多数情况下，插入的位点难以做到定点插入；插入的拷贝数也是随机的。因此，外源基因在转基因植物中的遗传是很复杂的。除此之外，外源基因丢失、基因重排等也都可能影响外源基因的稳定性。