1.目的：让目的基因在受体细胞中稳定存在，并且遗传给下一代；同时使目的基因能够表达和发挥作用。
2.步骤
（1）用一定的限制酶切割载体，使它出现一个切口。
（2）用同种限制酶或能产生相同末端的限制酶（同尾酶）切割含有目的基因的DNA片段。
（3）利用DNA连接酶将目的基因片段拼接到载体的切口处，形成重组DNA分子。
3.基因表达载体的组成：启动子＋目的基因＋终止子＋标记基因＋复制原点。
（1）启动子：一段有特殊序列结构的DNA片段，位于目的基因的上游，紧挨转录的起始位点，是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录成mRNA，最终表达出需要的蛋白质。
（2）终止子：一段有特殊序列结构的DNA片段，位于目的基因的下游，使转录在所需要的地方停下来。
（3）标记基因：一般为抗生素抗性基因，便于重组DNA分子的筛选。
（4）复制原点：与特定的受体细胞相匹配，使外源基因在受体细胞中能稳定复制并遗传。
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①目的基因中不能含有所用限制酶的识别序列，否则限制酶会将目的基因切断。
②目的基因要插入启动子与终止子之间才能被转录。
③直接将目的基因导入受体而不构建基因表达载体，可能导致目的基因不表达，原因有：
a.目的基因无复制原点，无表达所需启动子，故不能正常表达。
b.目的基因导入受体细胞后，往往会被该细胞分泌的酶分解消化掉，不能进行表达，目的基因与载体连接，就可以逃过受体细胞的防御系统，免遭破坏。
④将生物的所有DNA导入受体细胞，针对性差，完全靠运气，也无法确定哪些基因导入受体细胞。
⑤构建基因表达载体时，用一种限制酶酶切后，在DNA连接酶的作用下，会出现3种连接物 ：目的基因-目的基因连接物、载体-载体连接物、目的基因-载体连接物，可以根据标记基因进行筛选纯化。限制酶单酶切会自身环化和反向连接，双酶切可以避免自身环化和反向连接，有利于目的基因与载体的正确连接。
⑥有时为了满足应用需要，会在载体中人工构建诱导型启动子，当诱导物存在时，可以激活或抑制目的基因的表达。
⑦载体分为克隆载体（用于大量扩增外源DNA的载体）和表达载体（既能扩增又能表达出相应蛋白质的载体）。
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