一、个人防护和行为
本实验室仅涉及“未经培养的感染性材料的操作”,指未经培养的感染性材料在采用可靠的方法灭活前进行的抗原检测、血清学检测、核酸提取、生化分析以及临床样本的灭活等操作,需在生物安全二级实验室进行,同时采用生物安全三级实验室的个人防护。
二级生物安全防护:医用防护口罩、医用工作帽、乳胶手套、工作服、隔离衣、手卫生。
三级生物安全防护:医用防护口罩、双层乳胶手套、医用工作帽、工作服、面屏/护目镜、防护服、长脚套、手卫生。
二、样本接收
1.样本由经培训合格的医生采集,三层包装包裹样本,使用专用标本转运箱转运。转运箱封闭前,用75%酒精喷雾消毒。生化室及门急诊室建立传染病疑似(确诊)病例临床样本签收登记本,每班次安排专人转运、签收样本,双方核对各种样本及数量,确认后签字。
2.转运者做好防护,穿戴工作服、工作帽、外科口罩或医用防护口罩、乳胶手套。将标本转运箱和相关信息(如申请单)安全运抵实验室。期间保持转运箱平稳,避免剧烈震荡、颠簸。外部转运者安全防护同前,司机佩戴外科口罩专人专车进行运送,严格执行传染病检测样本接收、转运流程。
3.实验室接收需安排专人进行样本接收,穿戴工作服、医用帽、外科口罩、乳胶手套。接收时,确认转运者标识,确认转运箱特殊标识。转运途中按指定路线,避免任何碰撞。
4.从密封袋取出标本后,用75%酒精喷雾消毒。需要离心的样本,离心停止15min后打开离心机盖用75%酒精喷雾消毒。按检测项目和工作分工,将标本送抵相应专业室。
三、样本检验
(一)基本原则
如果操作过程不必打开样本盖(比如采血管的帽),则二级生物安全防护。如果操作过程须打开样本盖,或可能产生气溶胶,或可能接触标本本身,则三级生物安全防护。尽可能避免打开样本盖,打开则轻柔缓慢,和操作者面部保持距离。尽可能缩短打开的持续时间。尽可能避免产生气溶胶。操作尽可能在生物安全柜内进行。消毒液需要现用现配,24h内使用。
(二)高风险操作
直接接触标本本身,可能会有接触传播。标本核酸扩增试验时的处理、扩增,疑似、确诊患者呼吸道分泌物涂片、培养时的操作,容易产生气溶胶,二者是高风险过程,须三级生物安全防护、生物安全柜操作。
直接接触标本时,佩戴双层手套,如果有喷溅,须立即更换。
核酸扩增前,可以对标本先行消毒。包括56℃孵育30min,加蛋白酶K。保持环境有效负压,及时稀释、排除气溶胶。
分泌物涂片须在安全柜内涂布。涂布后须紫外线照射30min。标本培养相关操作(液化、振荡、涂布、划线等)须在安全柜内完成。看培养皿生长情况尽量在安全柜内进行。
血气标本检测前需排出管口未完全抗凝血液,将该排出血液直接挤入2000~5000mg/L含氯消毒液专用桶内,立即盖上桶盖,浸泡4h。
(三)生物安全柜使用注意事项
1.风机运行至少5min以后才能进行检测。
2.柜内尽量少放物品,以免影响气流循环。禁止把仪器物品摆放在操作台前面风口的地方,影响气流流动。(www.xing528.com)
3.避免出现手频繁出入,操作者身后人员频繁走动,阻挡空气栅格等行为。
4.操作应在生物安全柜中后部进 行。关机至少在风机运行5min以后。
5.每做一批标本后,以及所有的实验结束以后必须对生物安全柜进行消毒。流程包括长时间通风、紫外线照射、75%酒精擦拭、及时处理废液缸等。
四、检验后
1.废弃物品(包括血气标本)套上大小合适的双层黄色垃圾袋,检测完成后连同双层黄色垃圾袋置于专用运输箱内,在第一层与第二层之间用1000mg/L含氯消毒液喷洒消毒,运送至高压灭菌消毒室消毒处理。登记消毒处理标本的时间、种类、数量、操作人。
2.标本检测完毕后,于生物安全柜中重新加盖塞子,用双层自封袋密封,按规定保存。
3.检测仪器和操作台面的消毒用浓度为1000mg/L含氯消毒液或75%酒精擦拭仪器和操作台面,每日3次。
4.检测过程中产生的废液集中收集于容器中,投入2000~5000mg/L含氯消毒液,置4h后按医院废水处置。
5.所有无害化处理后的物品均需按医院感染性废物处置。
6.标本、废弃物处置符合生物安全原则、符合感染管理要求。
7.所有需要高压灭菌的物品均应在当天内处理完毕。
8.每天运送结束后,对运送工具进行清洁和消毒,含氯消毒液浓度为1000mg/L。运送工具被感染性医疗废物污染时,应当及时消毒处理。
五、防护物品处理
1.需分别设有清洁物品存放箱和污染物品存放箱。
2.标本处理完毕后,将手套、医用工作帽、口罩、一次性防护服、长脚套脱下,装入双层黄色垃圾袋内用1000mg/L含氯消毒液喷洒消毒,在第一层与第二层之间再次用1000mg/L含氯消毒液喷洒消毒,按感染性废物处理。
3.护目镜使用完后,先放入有效氯浓度为1000mg/L含氯消毒液专用桶内浸泡30min,取出用流水冲洗后晾干备用。
六、实验室生物安全操作失误或意外的处理
1.标本污染生物安全柜的操作台造成局限污染时使用2000mg/L含氯消毒液处理,消毒液需要现用现配,24h内使用。
2.标本造成实验室污染时应保持实验室空间密闭,避免不相关人员出入,设置限行标识,避免污染物扩散。使用2000mg/L含氯消毒液的毛巾覆盖污染区。必要时(大量溢洒时)可用过氧乙酸加热熏蒸实验室,剂量为2g/m3,熏蒸过夜;或20g/L过氧乙酸消毒液用气溶胶喷雾器喷雾,用量8mL/m3,作用1~2h。熏蒸时室内湿度60%~80%。
3.清理污染物严格遵循生物安全操作要求,采用压力蒸汽灭菌处理,并进行实验室换气等,防止次生危害。
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