精子细胞膜及核膜含有丰富的硫醇蛋白，对SDS及蛋白酶K有较强的抵抗作用，而DTT等巯基试剂可使之裂解。除毛干、指甲外，非精子细胞没有这一特性。
二步法：第一步用SDS及蛋白酶K裂解非精子细胞膜（阴道上皮细胞、白细胞等），释放非精子细胞DNA，离心沉淀后仅留精子；第二步用SDS、蛋白酶K，尤其是DTT裂解精子，释放精子DNA，具体如下：
（1）剪取适量检材，用适量纯水浸泡，纯水浸透检材斑迹，并有少量剩余。加入SDS，终浓度1%，蛋白酶K终浓度100μg/mL，37℃消化过夜。检材中含有大量上皮细胞时，可适当提高蛋白酶K浓度。
（2）置浸泡检材于有孔双层离心管内，13 000 r/min离心5 min，弃上清液及纤维，如果需要进行上皮细胞DNA检验则留用。沉渣用纯水反复洗涤4～5次，直至上清液透亮。(www.xing528.com)
（3）用Chelex100法提取精子DNA时，沉渣中加入200μLChelex100及终浓度分别为0.04 mol/LDTT及100μg/mL蛋白酶K，56℃消化数小时，不时振荡，100℃水浴8 min，离心取上清液备用。
用有机法提取精子DNA时，从沉渣中加入200μL纯水及DTT、蛋白酶K（终浓度同上），37℃数小时，转移离心上清液于另一离心管内，先加入等体积饱和酚，混匀，13 000 r/min离心5 min，离心上清液再分别用等体积饱和酚/三氯甲烷（1∶1）及等体积三氯甲烷采用上述相同条件各抽提一次，水相中加入2.5倍体积冷无水乙醇及终浓度为0.3 mol/LNaCl或0.3 mol/LpH5.2乙酸钠溶液，有絮状物时13 000 r/min离心10 min，无絮状物时，冷冻数小时后13 000 r/min离心20 min，沉淀DNA用70%乙醇洗涤一次，室温晾干后溶于适量TE或纯水中，4℃冰箱保存备用。
（4）用有机法或Chelex100法提取上皮细胞DNA。由于Chelex100法提取精子DNA较有机法为少，所以用Chelex100法提取精子DNA前应该留适量检材，以备Chelex100法未提取出DNA时再用有机法提取。
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