Y-DNA检测在刑侦中的应用：Chelex100法提取DNA

Chelex100最先由Singer-Sam等于1 989年报道，是应用最为广泛的DNA提取方法。Chelex100是一种螯合树脂，由苯乙烯、二乙烯苯共聚体组成，含有成对的亚氨基二乙酸盐离子，起着螯合基团的作用，对多价金属离子有极强亲和力，螯合金属离子，防止DNA降解，去除PCR抑制剂，提高了PCR的成功率。

生物检材，例如血痕，加入5%Chelex悬浮液，关键是100℃煮沸8 min。细胞破碎释放DNA。然后快速离心，Chelex悬浮颗粒和细胞碎片沉降到离心管底部，上清液可直接进行PCR扩增。采用碱性Chelex100，所提取DNA为单链。PCR反应体系内绝对不能有Chelex100，否则，PCR反应中所需要的Mg2+被螯合，使PCR扩增失败。现已证实Chelex可防止DNA在煮沸中降解，并在高温低离子强度下起着催化DNA释放的作用。

Chelex100能有效除去非核酸有机物，主要用于提取全血或血痕、精液或精斑、混合斑、毛发、培养细胞等的DNA。但因生物样本来源不同其操作方法有所差异。法医学上多使用该法，因其简便、快速、损失少、微量，10～50μL全血就可以提取到适合分析的DNA，适合法医使用。(www.xing528.com)

仪器设备与试剂：微型离心机；振荡器；水浴锅；微量可调移液器；灭菌去离子水；TE缓冲液；5%Chelex储备液（室温保存）；Chelex颗粒5 g；灭菌去离子水100 mL；1M NaOH调节pH值至9～11。

步骤：①吸取1 mLTE缓冲液加到1.5 mL的灭菌离心管内；加入40μL的全血（用量过大时可能会抑制PCR反应）。②室温放置15～30 min，间歇颠倒震荡或轻微漩涡震荡。③将样本置于离心管中室温最大速度离心2～3 min。④小心且尽可能多地弃去上清液，保留量不超过20μL在管中，若样本是血斑时保留管底呈团状的载体。⑤加入5%Chelex至终体积为200μL，短暂涡流震荡混匀。⑥56℃保温15～30 min。⑦剧烈漩涡震荡样本5～10 s。⑧沸水中样本煮8 min。可用悬浮架。⑨涡流剧烈震荡5～10 s。⑩将离心管内的样本在室温条件下以最大速度离心2～3 min后，样本可以进行DNA定量和DNA扩增。⑪在2～6℃或15～25℃条件下保存样本，重新使用时在室温中解冻并重复步骤～。