无机盐提取法是用乙酸钠通过盐析原理去除非核酸物质,主要用于血液或血痕、精液或精斑、毛发样本中DNA的提取,其优点是提取DNA回收率高,DNA质量也好于Chelex100法。
仪器设备与试剂:①速度13 000 r/min的微型高速离心机;②96孔×4、可调温度5℃~100℃的37℃、56℃干热器;③10μL、100μL、1 000μL可调、误差小于1μL的移液器;④含蔗糖、MgCl2、TritonX-100的细胞裂解缓冲液(CLB);⑤含EDTA2Na、NaCl的蛋白裂解缓冲液(PLB);⑥SSC溶液包括20%SDS,20 mg L/mL蛋白酶K;⑦1×TE溶液包括70%和100%乙醇,平衡盐缓冲液。
步骤:①吸取400μL细胞裂解液至1.5 mL离心管中,加入100μL全血。加盖后倒转混匀1 min。保证细胞裂解缓冲液与全血充分混匀,使细胞膜完全破裂。②在微型高速离心机上13 000 r/min离心1 min,弃去上清液,回收细胞核。③在旋涡振动器上,利用残留少许上清液,振动使细胞核团块散开,成为悬浮液。④加入100μL蛋白裂解液,充分混合,在微型高速离心机上12 000 r/min离心1 min,弃去上清液。将离心管倒置于滤纸上,吸干残留的上清液。⑤快速加入事先准备好的消化反应液(参考表5-1)。⑥微型高速离心机离心10 s,干热器100℃下8 min。⑦在微型高速离心机12 000 r/min离心2 min。DNA 存在上清液中,可直接用于PCR扩增反应,推荐用量在25μLPCR反应体系中吸取样本DNA量2.5μL。(www.xing528.com)
表5-1 所取全血量和最终DNA含量之间关系
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