婴幼儿食品及乳品中脲酶检测方法

1.测定原理

脲酶在适当酸碱度和温度条件下，催化尿素转化成碳酸铵。碳酸铵在碱性条件下生成氢氧化铵，与纳氏试剂中的碘化钾汞复盐作用，生成棕色的碘化双汞铵。

2.试剂

（1）尿素溶液（10g/L） 称取尿素5g，溶解于500mL水中。保存于棕色试剂瓶中，然后放在冰箱中冷藏，有效期为1个月。

（2）钨酸钠溶液（100g/L） 称取钨酸钠50g，溶解于500mL水中。

（3）酒石酸钾钠溶液（20g/L） 称取酒石酸钾钠10g，溶解于500mL水中。

（4）硫酸溶液（50mL/L） 吸取硫酸25mL，溶解于500mL水中。

（5）磷酸氢二钠溶液 称取无水磷酸氢二钠9.47g，溶于1000mL水中。

（6）磷酸二氢钾溶液 称取磷酸二氢钾9.07g，溶于1000mL水中。

（7）中性缓冲溶液 取磷酸氢二钠溶液611mL，磷酸二氢钾溶液389mL，两种溶液混合均匀。

（8）碘化汞-碘化钾混合溶液 称取红色碘化汞55g和碘化钾41.25g，溶于250mL水中。

（9）纳氏试剂 称取氢氧化钠144g溶于500mL水中，充分溶解并冷却后，再缓慢地移入1000mL的容量瓶中，加入碘化汞-碘化钾混合溶液250mL，加水稀释至刻度，摇匀，转入试剂瓶内，静置后，用上清液。此试剂需棕色瓶保存，冰箱中冷藏，有效期为1个月。

3.仪器(www.xing528.com)

1）电子天平：感量为0.01g。

2）旋涡振荡器。

3）恒温水浴锅：40℃±1℃。

4.分析步骤

取试管甲、乙两支，各装入0.10g试样，再吸入1mL水，振摇0.5min（约100次）。然后分别吸入1mL中性缓冲溶液。向甲管（样品管）吸入1mL尿素溶液，再向乙管（空白对照管）吸入1mL水。两管摇匀后，置于40℃±1℃水浴中保温20min。从水浴中取出两管后，各吸入4mL水，摇匀，再吸入1mL钨酸钠溶液，摇匀，吸入1mL硫酸溶液，摇匀，过滤，收集滤液备用。取上述滤液2mL，分别吸入到二支25mL具塞的比色管中。再各吸入15mL水，1mL酒石酸钾钠溶液，和2mL纳氏试剂，最后用水定容至25mL，摇匀。5min内观察结果。

5.分析结果的表述

分析结果按表4-3进行判断。

表4⁃3 结果的判断

6.检出限

该方法为定性法，检出限为0.7U。