如何测定硬糖中的合成色素？

1.仪器及试剂

（1）仪器 分光光度计、微量注射器、展开槽（25cm×6cm×4cm）、层析缸、滤纸、薄层板（5cm×20cm）、电吹风机、水泵。

（2）试剂 聚酰胺粉、硫酸-水（1+10）、甲醇-甲酸溶液（6+4）、甲醇、200g/L柠檬酸溶液、100g/L钨酸钠溶液、石油醚（沸程60～90℃）、海砂、乙醇-氨溶液、50%（体积分数）乙醇溶液、硅胶G、pH值=6的水、盐酸-水（1+10）、50g/L氢氧化钠溶液、碎瓷片、正丁醇-无水乙醇-氨水（6+2+3）、正丁醇-吡啶-氨水（6+3+4）、甲乙醇-丙酮-水（7+3+3）、甲醇-乙二胺-氨水（10+3+2）、甲醇-氨水-乙醇（5+1+10）、25g/L柠檬酸钠-氨水-乙醇（8+1+2）、0.1mg/mL色素标准使用液。

2.操作步骤

称取5.00g或10.00g粉碎的样品，加30mL水，温热溶解，若样液pH值较高，用200g/L柠檬酸溶液调至pH值=4。将处理后所得的溶液加热至70℃，加入0.5～1.0g聚酰胺粉充分搅拌，用200g/L柠檬酸溶液调pH值=4，使色素完全被吸附，若溶液还有颜色，可以再加一些聚酰胺粉。将吸附色素的聚酰胺全部转入G3垂融漏斗或玻璃漏斗中过滤（如用G3垂融漏斗过滤，可以用水泵慢慢地抽滤）。用经200g/L柠檬酸酸化至pH值=4的70℃水反复洗涤，每次20mL，边洗边搅拌，若含有天然色素，再用甲醇-甲酸溶液洗涤1～3次，每次20mL，至洗液无色为止；再用70℃水多次洗涤至流出的溶液为中性（洗涤过程中必须充分搅拌）；然后用乙醇-氨溶液分次解吸全部色素，收集全部解吸液，置于水浴中驱氨。如果为单色，则用水准确稀释至50mL，用分光光度法进行测定。如果为多种色素混合液，则用纸色谱或薄层色谱法分离后再测定，即将上述溶液置于水浴上浓缩至约2mL后移入5mL容量瓶中，用50%（体积分数）乙醇洗涤容器，洗液并入容量瓶中并稀释至刻度。将纸色谱的条状色斑（包括扩散的部分），分别用刮刀刮下，移入漏斗中，用乙醇-氨溶液解吸色素，少量反复多次解吸，至解吸液无色为止，收集解吸液于蒸发皿中，置于水浴上驱氨，移入10mL比色管中，加水至刻度，作比色用。分别吸取0.00mL、0.50mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL胭脂红、苋菜红、柠檬黄、日落黄色素标准使用溶液，或0.00mL、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL、1.00mL亮蓝、靛蓝色素标准使用溶液，分别置于10mL比色管中，各加水稀释至刻度。上述样品与标准管分别用1cm比色皿，以零管调节零点，于一定波长下（胭脂红510nm，苋菜红520nm，柠檬黄430nm，日落黄482nm，亮蓝627nm，靛蓝620nm），测定吸光度，分别绘制标准曲线比较或与标准色列目测比较。

在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。

3.数据记录及处理(www.xing528.com)

1）数据记录：将试验数据填入下表中。

①标准吸收曲线：

②测定：

2）以各标准液中色素的质量为横坐标，测得各标准液的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。根据各样品液的吸光度，从标准曲线上查出各样品液中色素的质量。

3）按式（3-13）计算硬糖中各种色素的含量。在重复性条件下，获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过平均值的10%。