探究6月饼中大肠菌群的检测方法

1.仪器及试剂

（1）仪器 恒温箱、水浴锅、天平、显微镜、均质器或乳钵、温度计、直径为90mm的平皿、试管、广口瓶或三角瓶、吸量管、载玻片、接种针、直径约为5mm的玻璃珠、酒精灯、试管架。

（2）试剂 月桂基硫酸盐胰蛋白胨、煌绿乳糖胆盐、结晶紫中性红胆盐琼脂、磷酸盐缓冲液、无菌生理盐水、无菌1mol/L NaOH、无菌1mol/L HCl。

2.操作步骤

以无菌操作将25g月饼放入盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000～10000r/min均质1～2min，或放入盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1～2min，制成1∶10的样品匀液。样品匀液的pH值应为6.5～7.5，必要时分别用1mol/L NaOH或1mol/L HCl调节。用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1∶10样品匀液1mL，沿管壁缓缓注入9mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用1支1mL无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成1∶100的样品匀液。根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成10倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1次，换用1支1mL无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15min。选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液，每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL（如接种量超过1mL，则用双料LST肉汤），36℃±1℃培养24h±2h，观察管内是否有气泡产生，24h±2h产气者进行复发酵试验，如未产气则继续培养至48h±2h，产气者进行复发酵试验。未产气者为大肠菌群阴性。用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）管中，36℃±1℃培养48h±2h，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。根据确证的大肠菌群LST阳性管数，检索MPN表（见附录I），报告每g（mL）样品中大肠菌群的MPN值。(www.xing528.com)

3.数据记录及处理

1）将试验结果填入下表中。

2）根据上述结果查附录IMPN检索表，得出每克月饼中大肠菌群的最可能数。