如何制备单元色样品和标准曲线绘制？

（1）样品处理

1）淀粉、软糖、硬糖、蜜饯类：称取粉碎样品5～10g，加水30mL，加热溶解，用柠檬酸溶液调pH值=4。

2）奶糖：称取样品10g，粉碎，加30mL乙醇-氨溶液溶解，置水浴上加热浓缩到20mL左右，立即用1∶10硫酸调至微酸性（用pH试纸测定），继续滴加1mL1∶10硫酸，再加1mL钨酸钠溶液使蛋白质沉淀，过滤，用少量水洗涤，收集滤液备用。

3）蛋糕类：称取样品10g，粉碎，加放少量海砂，混匀，用电吹风吹干，加入30mL石油醚搅拌静置片刻，倾出石油醚，如此重复2～3次以除去油脂，再吹干研细，然后转入漏斗中，用乙醇-氨溶液提取色素直至色素提取完全，以下按2）自“置水浴上加热浓缩至20mL左右”起依同样方法操作。

4）饮料类：吸取样液50mL置于100mL烧杯中（含有CO₂的饮料应加热排除CO₂）。

5）配制酒：吸取样液100mL置于200mL烧杯中，加热排出乙醇，加热前放几片碎瓷片。

（2）吸附分离

1）吸附：处理过的样液加热至70℃之后，加入0.5～1.0g聚酰胺粉，并充分混匀，然后用柠檬酸溶液调pH值≈4，使色素吸附完全（若溶液中仍有颜色，可再加入少量的聚酰胺粉）。

2）洗涤：将吸附色素的聚酰胺全部转入G3垂融漏斗或玻璃漏斗中过滤（若用前者可用水泵抽滤），用经200g/L柠檬酸调节到pH值=4的70℃水反复洗涤，每次20mL，若含天然色素，可再用甲醇-甲酸洗涤1～3次，每次20mL，直至洗涤至无色为止。再用70℃水洗涤至中性，洗涤过程中必须充分搅拌。

3）解吸：用乙醇-氨溶液20mL左右分次解吸全部色素，收集全部解吸液，置于水浴中驱氨。若是单元色，用水定容至50mL，用分光光度计比色；若为混合色，将解吸液水浴浓缩至2mL左右，转入5mL容量瓶中，用50%（体积分数）乙醇洗涤，洗液并入容量瓶中，用50%（体积分数）乙醇定容。(www.xing528.com)

（3）薄层层析法定性

1）薄层板的制备：称取1.6g聚酰胺粉、0.4g可溶性淀粉及2g硅胶G，置于合适研钵中，加水15mL研匀后，立即置于涂布器中铺成0.3mm厚的板。在室温下晾干后，于80℃干燥1h，置干燥器中备用。

2）点样：用点样管吸取浓缩定容后的样液0.5mL，在离底边2cm处从左至右点成与底边平行的条状，在板的右边点2μL色素标准溶液。

3）展开：取适量的展开剂（苋菜红与胭脂红用甲醇-乙二胺-氨水，靛蓝、亮蓝用甲醇-氨水-乙醇，柠檬黄与其他色素用柠檬酸钠-氨水-乙醇）倒入展开槽中，将薄层板放入展开，待色素明显分开后，取出晾干，与标准色斑比较其比移值，确定色素种类。

（4）测定

1）单元色样品溶液的制备：将薄层层析板上的条状色斑剪下，用刀刮下移入漏斗中，用乙醇-氨溶液解吸色素（少量多次至解吸液无色），收集解吸液于蒸发皿中水浴驱氨后转入10mL比色管中，用水定容备用。

2）标准曲线绘制：分别吸取：0mL、0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL胭脂红、苋菜红、柠檬黄、日落黄色素标准使用液，或0mL、0.2mL、0.4mL、0.6mL、0.8mL、1.0mL亮蓝、靛蓝色素标准使用液，分别置于10mL带塞比色管中，加水至刻度，在特定波长处测定吸光度，绘制标准曲线。

3）样品测定：取单元色样品液在对应波长下测定吸光度，在标准曲线上查得色素含量。