试样：称取约5g试样，精确至0.01g，置于250mL烧瓶中。
皂化：加入5mL氢氧化钾-乙醇溶液和一些沸石。将烧瓶与回流冷凝管连接好后，小心煮沸回流1h。停止加热，从回流管顶部加入100mL水并旋转摇动。
如果提取的不皂化物用于测定生育酚，则必须添加联苯三酚且尽快完成操作（30min以内）。
不皂化物的提取：冷却后转移皂化液到500mL分液漏斗中，用100mL乙醚分几次洗涤烧瓶和沸石，并将洗液也倒入分液漏斗。盖好塞子，倒转分液漏斗，用力摇1min，小心打开旋塞，间歇释放内部压力。静置分层后，将下层皂化液尽量完全放入第二只分液漏斗中。如果形成乳化液，可加少量乙醇或浓氢氧化钾或氯化钠溶液进行破乳。
采用相同的方法，每次用100mL乙醚再提取皂化液两次，收集三次乙醚提取液放入装有40mL水的分液漏斗中。
乙醚提取液的洗涤：轻轻转动装有提取液和40mL水的分液漏斗。
警告：剧烈的摇动可能会形成乳化液。
等待完全分层后弃去下面水层。用40mL水再洗涤乙醚溶液两次，每次都要剧烈震摇，且在分层后弃去下面的水层。排出洗涤液时需留2mL，然后沿轴线旋转分液漏斗，等待几分钟让保留的水层分离。弃去下面的水层，当乙醚溶液到达旋塞口时关闭旋塞。
用40mL氢氧化钾水溶液、40mL水相继洗涤乙醚溶液后，再用40mL氢氧化钾水溶液进行洗涤，然后用40mL水洗涤至少两次以上。
继续用水洗涤，直到加入1滴酚酞溶液至洗涤液后，不再呈粉红色为止。(www.xing528.com)
蒸发溶剂：通过分液漏斗的上口，小心地将乙醚溶液全部转移至250mL烧瓶中。此烧瓶需预先于103℃±2℃的烘箱中干燥，冷却后称量，精确至0.1mg。在沸水浴上蒸馏回收溶剂。
加入5mL丙酮，在沸水浴上转动时倾斜握住烧瓶，在缓缓的空气流下，将挥发性溶剂完全蒸发。
残留物的干燥和测定：将烧瓶水平放置在103℃±2℃的烘箱中，干燥15min；然后放在干燥器中冷却，取出称量，准确至0.1mg。
按上述方法间隔15min重复干燥，直至两次称量质量相差不超过1.5mg。如果三次干燥后还不恒重，则不皂化物可能被污染，需重新进行测定。
注意：如果条件允许，尤其是不皂化物需要进一步检测时，可使用真空旋转蒸发器。
当需要对残留物中的游离脂肪酸进行校正时，将称量后的残留物溶于4mL乙醚中，然后加入20mL预先中和到使酚酞指示液呈淡粉色的乙醇。用0.10mol/L标准氢氧化钾醇溶液滴定到相同的终点颜色。
以油酸计算游离脂肪酸的质量，并以此校正残留物的质量。
测定次数：同一试样需进行两次测定。
空白试验：用相同步骤及相同量的所有试剂，但不加试样进行空白试验。如果残留物超过1.5mg，需对试剂和方法进行检查。
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