常用灭菌方法及注意事项

1.加热灭菌

加热灭菌是通过加热高温使菌体内蛋白质变性凝固，酶失去活性，从而达到杀菌目的。蛋白质的凝固变性与其自身含水量有关，含水量越高，其凝固所需要的温度越低。

加热灭菌法包括湿热灭菌和干热灭菌两种。在同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，湿热的穿透力比干热强，可增加灭菌效力；湿热的蒸汽有潜热存在，这种潜热，能迅速提高被灭菌物品的温度。

（1）干热灭菌法 通过使用干热空气杀灭微生物的方法叫作干热灭菌法。一般是把待灭菌的物品包装后，放入干燥箱中加热至160℃，维持2h。常用于玻璃仪器、金属器具的灭菌。凡带有橡胶的物品、液体及固体培养基等都不能用此法灭菌。

1）灭菌前的准备：玻璃仪器等在灭菌前必须经正确包裹和加塞，以保证玻璃仪器灭菌后不被外界杂菌所污染。

常用玻璃仪器的包扎和加塞方法：平皿用纸包扎或装在金属平皿筒内；三角瓶在棉塞与瓶口外再包以厚纸，用棉绳以活结扎紧，以防灭菌后瓶口被外部杂菌所污染；吸管用拉直的曲别针将棉花轻轻捅入管口，松紧必须适中，管口外露的棉花可统一通过火焰烧去，灭菌时将吸管装入金属管筒内进行灭菌，也可用纸条斜着从吸管尖端包起，逐步向上卷，头端的纸卷捏扁并拧几下，再将包好的吸管集中灭菌。

2）干燥箱灭菌：将包扎好的物品放入干燥箱内，注意不要摆放太密，以免妨碍空气流通；不得使器皿与干燥箱的内层底板直接接触。将干燥箱的温度升至160℃并恒温2h，注意勿使温度过高，若超过170℃，器皿外包裹的纸张、棉花会被烤焦燃烧。如果是为了烤干玻璃仪器，温度达120℃持续30min即可。当温度降至50～60℃时方可打开箱门，取出物品，否则玻璃仪器会因骤冷而爆裂。

另外，被污染的纸张、试验用动物尸体等无经济价值的物品可以通过火焚烧掉；对于接种环、接种针或其他金属用具等耐燃烧物品，可用火焰灼烧灭菌法直接在酒精灯火焰上烧至红热进行灭菌；直接用火焰灼烧灭菌，迅速彻底。此外，在接种过程中，试管或三角瓶口也采用灼烧灭菌法通过火焰灼烧而达到灭菌的目的。

（2）湿热灭菌法 常用的湿热灭菌法有巴氏消毒法、煮沸消毒法、流通蒸汽消毒法及高压蒸汽灭菌法。

1）巴氏消毒法：某些物质在高热下易被破坏。巴斯德首先提倡把液体物质在较低的温度下消毒，这样既可杀死液体中致病菌的繁殖体，又不破坏液体物质中原有的营养成分。牛奶或酒类常用此法消毒。典型的温度时间组合有两种：一种是61.1～62.8℃，30min；另一种是72℃，15～30s。现多用后一种。(www.xing528.com)

2）煮沸消毒法：此方法适用于器材、器皿、衣物及小型日用物品的消毒。

3）间歇灭菌法：此方法适用于不宜高温灭菌的物质，如不耐热的药品、含血清的培养基等。

为了消灭其中的芽孢，必须用间歇灭菌法。具体方法是：用阿诺氏灭菌器、水浴锅或蒸笼加热约100℃维持30min，每日进行一次，连续两天。为了达到彻底灭菌，按照上述方法再进行第三次加热，这样所有的芽孢将被全部杀死。必要时，加热温度可低于100℃（如75～95℃），而延长每次加热的时间至30～60min，或增多加热次数，也可收到同样效果。

4）高压蒸汽灭菌法：高压蒸汽灭菌是微生物试验中最常用的灭菌方法。这种灭菌方法是利用水的沸点随着蒸汽压力的升高而升高的原理。当蒸汽压力达到103.4kPa时，水蒸气的温度升高到121℃，经15～20min，可全部杀死锅内物品上的各种微生物和它们的孢子或芽孢。此方法适用于耐高温而又不怕蒸汽的物品的灭菌，一般培养基和敷料、生理盐水、耐热药品、金属器材、玻璃仪器以及传染性标本和工作服等都可应用此法灭菌。

2.过滤除菌法

凡不能耐受高温或化学药物灭菌的药液、毒素、血液等，可使用过滤除菌法除菌。

3.紫外线杀菌法

日光中杀菌的主要成分是紫外线。紫外线波长200～300nm，具有杀菌作用，其中以253.7nm最强，这与DNA的吸收光谱范围一致。紫外线的穿透力不强，普通玻璃、尘埃、水蒸气均能阻拦紫外线，故只能用于手术室、无菌室等空气消毒，也可用于不耐热物品或包装材料的表面消毒。在消毒照射时，工作人员应佩戴保护眼镜，以防紫外线损害角膜而引起急性角膜炎。