1.产品厂家及型号
厂家：德国凯杰(QIAGEN),型号：Rotor-Gene Q系列实时定量PCR仪。
2.产品特点
Rotor-Gene Q独特的离心转子式设计,使每个PCR管在反应仓里匀速旋转,空气不断高速流动,所有样品在快速的升降温过程中始终处于高度一致的温度和信号采集光路条件,并且这种离心式的设计还消除了管和管之间的差异及边缘效应,相较传统板式仪器板块内部温度的差异和复杂的光路系统,Rotor-Gene Q在温度和荧光采集均一性方面具有出色的性能。该系列仪器温度均一性为±0.02 °C,提高了检测结果的准确性和重复性;并且无须在反应体系中加入其他校准荧光素,也不用采用特殊的PCR管,降低了后续的运行成本;具备温度自动校正功能,可保证仪器的长期稳定运行;搬动时无须校正,可作为车载仪器,方便突发事件的临场检测。
3.用途
利用相对定量,绝对定量或高分辨率熔解分析(HRM)实验用于转基因动植物的检测,食品中病原微生物的检测,基因的表达调控分析,细菌和病毒的快速分型和鉴定等。
4.工作原理
Rotor-Gene系列荧光定量PCR仪采用荧光标记的方法,检测目标基因在扩增过程中的荧光信号,通过检测荧光信号的变化来分析目标基因的最终浓度,从而计算扩增前的原始样品的浓度,而HRM功能是在温度不断升高过程中,检测结合到DNA双链中的荧光染料信号的变化过程,并绘制变化曲线,通过样本之间变化曲线的差别来分析其DNA序列的差异。
5.主要参数
5.1 加热原理：旋转式空气传热,离心式设计保证最佳的温度均一性。
5.2 温度均一性：≤±0.02 ℃,保证样品最佳重复性。
5.3 温度分辨率：±0.02 ℃,可用于高分辨率熔解分析(HRM)。
5.4 反应时间：45min内可完成一个40个循环的快速PCR反应。
5.5 检测通道：2～6通道检测。
5.6 样品通量：单次实验1～100个样品。
5.7 PCR管底部检测,顶端可用于标记,普通光学透明PCR管即可满足要求。
5.8 反应体积：1～50μL。
5.9 检测灵敏度：最低可以检测单拷贝基因。
5.10 适用多种荧光染料,包括Sybr Green I、FAM、TET、JOE、VIC、HEX等。
5.11 仪器搬动无须校正,支持温度自动校正功能。
5.13 软件功能：支持绝对定量、相对定量Ct法、双标准曲线法、比较定量法、HRM分析等,数据无须导出即可自动完成多种运算分析。
6.操作规程
6.1.1 打开仪器电源,打开电脑电源,在电脑上打开Rotor-Gene Q控制软件。
6.1.2 将装载好样本管的转子放入仪器,在电脑上进入快速向导,选择使用的转子和试剂盒,编辑样本信息,开始运行。
6.1.3 运行结束后选择分析,软件自动对实验可靠性和样本阴阳性进行判读。
6.1.4 依次关闭软件,仪器和电脑。
6.2 使用其他商业试剂盒或自研试剂
6.2.1 打开电脑电源,打开仪器电源,在电脑上打开Rotor-Gene Q控制软件。
6.2.2 将装载好样本管的转子放入仪器,在电脑上进入快速向导,选择使用的转子,按照商业试剂盒或自研试剂要求设置反应条件,编辑样本信息,开始运行。
6.2.3 运行结束后选择分析,软件给出样本的CT值,结合商业试剂盒说明书或自研试剂分析说明进行结果判读。(www.xing528.com)
6.2.4 依次关闭软件,电脑和仪器。
7.设备的维护及保养
7.1 连接仪器的电脑不得安装其他与实验无关的程序软件(如游戏);电脑内不得安装即时启动的软件(如金山词霸、即时启动的防病毒软件);最好不要设置屏幕保护和自动黑屏。
7.2 不要随意修改和删除电脑内,特别是与操作软件相关的文件。必要时与原厂工程师联系指导。
7.3 在仪器工作时不要应用其他程序。
7.4 防止任何液体进入仪器内部,仪器放置位置应远离水槽。
7.5 注意保持仪器的清洁,不用时用棉布遮盖防灰。
7.6 仪器清洁时不要使用有机溶剂,用柔软的无麻成分的布以去离子水擦拭表面。注意不要有水进入仪器内部。光学表现的保证依靠保持位于光源与检测器之间的透镜的清洁。只需用棉签蘸上乙醇对其进行擦拭即可。如果转子反应仓被污染了,可用0.1 %(v/v)漂白剂湿润(但不会往下滴)的无纺布擦拭反应仓表面,再用浸润PCR级纯水的无毛绒布擦拭,以去除漂白剂痕迹。
7.7 实验结束后,应马上将反应管从仪器中取出,并根据实验室废弃物的处理程序妥善处理。
7.8 保持工作台干净,确保没有灰尘和纸张。Rotor-Gene Q空气入口处在仪器底部,诸如纸张或灰尘等松散的材料可能会影响仪器的性能。
7.9 如发现扩增曲线锯齿状,应检查电压是否稳定,应尽量配置UPS电源,同时检查光源与检测器之间的透镜是否清洁,如不干净需要擦拭。
8.常见故障的排除见表4-3。
表4-3 常见故障的排除
9.Rotor-Gene Q原厂配套致病菌检测试剂盒
*Salmonella spp.沙门氏菌
*Listeria spp.李斯特菌
*L.Monocytogenes单核细胞增生李斯特菌
*Campylobacter spp.弯曲杆菌
*Escherichia coli(VTEC,O157)大肠埃希氏菌O157
*Cronobacter spp.克洛诺菌
*Staphylococcus aureus金黄色酿脓葡萄球菌
*Quant Legionella spp.军团菌
*Quant L.pneumophila嗜肺军团菌
*Shigella spp.志贺氏菌
*Yersinia enterocolitica小肠结肠炎耶尔森氏菌
*Vibrio弧菌
Rotor-Gene Q作为开放的实时定量PCR仪,还可以使用其他商业试剂盒或者用户自行研发的检测试剂。
10.设备图片
图4-5 Rotor-Gene Q系列实时定量PCR仪
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